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目的体内外观察紫杉醇联合应用miR-200a对胃腺癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法1体外实验部分：细胞分为五组：miR-200a组,联合组,紫杉醇组,无义序列组,对照组。紫杉醇组应用50nmol/L紫杉醇单独处理胃癌SGC-7901细胞48h,miR-200a组应用脂质体转染miR-200a模拟物(miR-200a mimics)48h,联合组为二者联合应用,无义序列组转染无义序列RNA,对照组无任何处理。提取各组细胞总RNA,应用实时定量PCR技术(RT-PCR)检测miR-200a转染效果。通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平和周期分布,克隆形成实验观察细胞的增殖能力,Transwell侵袭实验和细胞划痕实验观察细胞的侵袭迁移能力。通过以上实验比较单独应用紫杉醇与联合应用miR-200a对胃癌细胞增值侵袭能力影响的差异。提取各组细胞总蛋白,应用免疫印迹技术(Western-blot)检测细胞中β-连环蛋白(p-catenin)水平的变化。2体内实验部分：取对数生长期的SGC-7901细胞,胰酶消化后应用PBS洗涤两次,镜下计数,于原代裸鼠两侧腹股沟皮下注射0.1ml细胞悬液,每侧1×107个细胞。待原代裸鼠成瘤后取出瘤体并移植到子代裸鼠腹股沟皮下。当子代裸鼠皮下肿瘤生长到大小约130mm3时,随机分为5组,每组6只,并开始进行治疗。子代裸鼠200a组进行瘤体原位多点注射miR-200a与转染试剂混合物20μL,隔天一次。紫杉醇组按裸鼠体重给予紫杉醇(20mg/kg),腹腔注射以生理盐水稀释后的紫杉醇注射液,每7天给药一次。联合组为二者联合应用,无义序列组原位注射无义序列RNA,对照组不作处理。定期测量瘤体长短径,计算肿瘤体积(肿瘤体积=1/2长径×短径2)。开始治疗三周后处死裸鼠,取出瘤体石蜡包埋切片,对切片进行免疫组织化学染色及TUNEL原位凋亡实验,检测细胞在体内的增殖及凋亡情况。结果1.RT-PCR技术检测表明,转染miR-200a mimics后,200a组及联合组中miR-200a水平较其他三组显著升高(P<0.01),满足后续实验需要；2.流式细胞凋亡检测表明50nmol/L紫杉醇联合应用miR-200a细胞早期凋亡率(22.82±1.43)%高于紫杉醇组的(18.74±1.27)%(P<0.05)；3.流式细胞仪测定显示联合组阻滞于G2/M期细胞比例(63.74±1.76)%高于单独应用紫杉醇组的(51.75±2.01)%,结果具有统计学差异(P<0.01)；4.细胞克隆形成实验显示联合用药组克隆形成率(4.03±0.25)%与紫杉醇组的(7.80±0.30)%相比显著降低(P<0.01);5.Transwell侵袭实验表明联合用药组穿过小室的细胞数目为22.00±2.00,少于紫杉醇组的56.33±5.13(P<0.01)；6.细胞划痕试验表明在划痕后48小时,联合组细胞迁移率为(21.43±2.34)%,与紫杉醇组迁移率(54.26±2.49)%相比已显著降低(P<0.01)；7.β-catenin蛋白水平在联合组及200a组中较其他各组均降低(P<0.01)。1.裸鼠皮下肿瘤在第八次治疗后,联合组与其他各组相比,肿瘤体积已经显著减小(P<0.05)直到治疗结束；2.处死裸鼠取出瘤体,经免疫组织化学染色显示,与凋亡相关的指标Caspase-3蛋白在联合组瘤体中表达升高,与细胞增殖相关的PCNA蛋白在联合组中较紫杉醇组瘤体表达降低,β-catenin在miR-200a组及联合组中表达显著降低：3.肿瘤石蜡切片TUNEL原位凋亡实验显示联合组凋亡指数(40.31±3.51)%较紫杉醇组的(26.55±6.09)%显著升高(P<0.01)。结论miR-200a能于体内外增强紫杉醇对胃癌SGC-7901细胞增殖侵袭能力的抑制作用,这种作用可能为今后胃癌的化疗及基因靶向治疗提供新的思路。