CmPGs基因家族成员鉴定及其在薄皮甜瓜果实质地形成中的作用初探

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vbwu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)被认为是一种重要的细胞壁水解酶,其在果实成熟后期对细胞壁中果胶等物质的降解起到关键作用。其主要功能在于能够催化果胶多糖的α-1,4-D-半乳糖苷键水解,使得细胞壁结构解体,进而改变果实质地。已有大量研究证明,PG对果实成熟后期质地转化的重要作用,然而在薄皮甜瓜中关于其家族成员的作用报道较少。本研究对薄皮甜瓜中PG家族成员进行了鉴定,并针对两种不同质地特性的薄皮甜瓜品种‘HPM’(绵软质地)和‘HDB’(酥脆质地)在果实成熟发育过程中PG家族成员的表达模式进行了分析测定。并以‘HPM’和‘HDB’为试材,通过基因瞬时转化技术对筛选出的关键基因成员CmPG1与CmPG2进行了基因功能的初步验证。进一步明确了CmPGs基因家族成员在薄皮甜瓜果实发育成熟过程中对果实质地形成的调控作用,为提高薄皮甜瓜果实质地品质提供理论依据。主要研究结果如下:1、从甜瓜基因组中鉴定出18个PG基因家族成员,其中CmPG1,CmPG2,CmPG3已有前人报道及命名,其余基因根据拟南芥对应基因的同源性,依次命名为CmPG4-18。18个CmPGs成员被划归为5个分支;分布在除第12条染色体外的其余11条染色体上;蛋白长度在397~557aa,CDS序列长度在1197bp~1674bp之间;蛋白分子量在43.16~61.10 k Da之间,等电点在4.86~9.26之间;部分CmPG蛋白存在保守结构域的缺失现象,同源性较高的CmPG基因结构较为相似,其中CmPG18外显子数目最多。2、薄皮甜瓜PG基因家族的18个成员均在薄皮甜瓜果实中有不同程度表达。我们发现CmPG1,CmPG2这两个基因均在两品种果实成熟后期呈现出较高的表达水平。在‘HDB’成熟后期的CmPG1,CmPG2表达量可以达到数百倍,CmPG2在30d的表达量甚至更高;而CmPG1,CmPG2在‘HPM’成熟后期则表现出一个极高的表达水平,CmPG2在30d达到了千倍高的表达水平,CmPG1在25和30d均达到千倍以上的表达量。所以,我们以此为依据筛选CmPG1,CmPG2作为关键基因,用于后续的果实瞬时转化试验。此外,‘HPM’中有8个CmPGs成员的表达量较少,‘HDB’中也有8个CmPGs成员的表达水平较低,这些基因或许不直接参与调控果实软化。而CmPG9,CmPG10,CmPG13这三个基因表达水平极低甚至有下调的趋势,所以我们推测这些CmPGs可能与薄皮甜瓜果实的软化无关。3、对‘HPM’果实进行农杆菌诱导的CmPG1,CmPG2沉默处理后发现,随着侵染天数的增加,果实表面侵染面积增大,果肉部分颜色变化加深。测定CmPG1,CmPG2基因的表达量发现,两基因在整个取样期间表达模式基本一致且相对稳定,而对照组果实的基因表达量在取样中后期有明显的升高趋势。同时,沉默果实硬度指标的下降速度明显减缓,且沉默果实的咀嚼性、胶着性在取样后期均显著低于对照组,而粘附性指标在整个取样期间显著高于对照组,内聚性指标与对照组相比没有明显差异。此外,CmPG1,CmPG2沉默果实的多聚半乳糖醛酸酶活性在3~8d明显要低于对照组,果胶组分中的水溶性果胶和共价结合型果胶含量也始终低于对照组,而离子型果胶的含量在整个取样期间均高于对照组且均呈现出显著差异。4、对‘HDB’果实进行农杆菌诱导的CmPG1,CmPG2过表达处理后发现,随着侵染天数的增加,果实表面侵染面积增大,果肉部分颜色变化加深且检测到的LUC荧光信号逐渐增强。在侵染3d以后CmPG1,CmPG2的表达水平均显著高于对照组,同时表现出果实硬度指标的下降速度明显加快,且过表达果实的咀嚼性、粘附性、内聚性在取样后期始终高于对照组,而果实的胶着性指标在前4d没有显著差异,4d以后过表达果实的胶着性要显著高于对照组。此外,CmPG1,CmPG2过表达果实的多聚半乳糖醛酸酶活性在侵染3d以后明显高于对照组,果胶组分中的水溶性果胶和共价结合型果胶含量也始终高于对照组,而离子型果胶与对照组相比则表现出无显著差异。综上,18个CmPGs家族成员在两品种薄皮甜瓜果实中均有不同程度的表达;在两不同品种果实成熟发育过程中参与果实质地软化的CmPGs家族成员数量存在差异;高表达的关键基因CmPG1,CmPG2可能通过降解离子型果胶降解果实细胞壁,进而影响果实质地软化。
其他文献
与氧化物玻璃相比,硫系玻璃具有宽红外透过窗口、高的非线性折射率等优势,在红外成像、空间遥感等领域具有较高应用价值。为获得高性能硫系玻璃,组分开发设计一直备受国内外学者广泛的关注。本文通过熔融-淬冷技术制备了Ga8Sb32S60-xTex(x=0,2.5,5,7.5,10)、Ga2Ge7Te31-xSx(x=0,7.5,15.5,23.25,31)、Ga10Ge15Te75-xSx(x=0,2.5,
学位
仿生材料是指模仿自然界中生物的各种特点或特性而开发的材料。在众多仿生材料中,仿生超疏水材料由于其特殊的表面浸润性,在人们的日常生活中和工农业生产中都具有非常广泛的应用前景。然而,目前制备超浸润材料存在诸多制约因素。例如,制备过程中用到污染环境的含氟物质;制备工艺复杂、需要用到昂贵的设备;制备工艺仍停留在实验室阶段,无法大面积生产;生产制备出的材料稳定性差,无法在实际生活中长时间使用等。此外,设计的
学位
精密加工对于机械制造行业的发展起到至关重要的作用。超硬磨具种类繁多,用途各异,可以对各种材料进行高精度加工,它的研究对于国家发展具有重要意义。微晶玻璃结合剂金刚石磨具属于超硬磨具的一种,具有高磨削效率、高加工精度、使用寿命长等诸多优点,被广泛应用于各种材料的生产加工。微晶玻璃结合剂金刚石磨具的性能主要受到微晶玻璃结合剂的影响,因此,具有低烧结温度、与金刚石相匹配的热膨胀系数、以及高抗折强度的微晶玻
学位
草莓(Fragaria×ananassa Duch.)属于蔷薇科草莓属多年生草本植物,具有较高的经济价值和营养价值。草莓开花的早晚直接关系到草莓的生产环节,间接影响了草莓的经济收益。开花是一个极其复杂的过程,需要多个基因交叉调控,才能精准控制开花时间。本研究通过构建MIR160、ARF18过表达载体和ARF18敲除载体,得到草莓转基因植株,通过观察草莓转基因植株的表型,揭示出草莓mi R160-A
学位
缅甸中文教育自1965年仰光外国语大学成立中文系以来,形成了民间办学和官方办学并行发展的双轨格局。如今,民间办学以华文教育为主体,各类私立语言培训机构、国际学校多元化发展;官方办学主要集中于高校,已有相对完整的中文相关专业本、硕、博人才培养体系。缅甸孔子课堂,作为中缅合作办学的代表,已逐渐成为满足缅甸社会多元中文学习需求的重要中文教育力量,并成为双轨发展格局下,二者之间的桥梁与纽带。受地缘、历史、
期刊
目前,在大多数高等植物中发现SWEET(Sugars Will Eventually be Exported Transporters)糖转运蛋白家族成员的存在,但是对于其功能的研究主要集中在拟南芥和水稻上,而在番茄上有关SWEET家族功能相关研究仍然较少。已有报道表明拟南芥中Clade I成员参与葡萄糖转运,Clade II成员参与植株生长发育过程,Clade III成员参与生殖器官发育及赤霉素
学位
番茄品种多样、营养丰富、种植广泛,是最主要的蔬菜作物之一。然而,在设施番茄生产过程当中,由于低温、弱光导致番茄落花与落果严重影响了番茄的产量,是导致番茄设施产量下降的重要因素之一。其中,植物激素对番茄花柄脱落的影响十分重要,但在番茄花柄脱落的研究探索中,关于表观遗传学影响番茄花柄脱落的报道处于未知阶段,表观遗传学修饰主要包括三种修饰:DNA修饰、RNA修饰和蛋白质修饰。近些年来,随着DNA修饰和蛋
学位
番茄在生产栽培过程中,落花落果影响产量的情况时有发生。番茄脱落一般发生在特定的分化部位-离区,KD1在番茄花柄和叶柄脱落过程中的作用已被报道,即KD1通过影响生长素通过花柄离区的浓度以及响应梯度促进脱落,KD1是脱落的正调控因子。而作为转录因子的KD1缺乏HD结构域,这表明KD1的功能可能依赖于与DNA结合的其他蛋白;亦或是KD1通过调控其他互作蛋白的活性来调控脱落的改变,但相关机制不清楚。本文通
学位
大白菜作为我国重要的蔬菜作物,其产量严重受到根肿病的影响,挖掘抗根肿病基因、培育抗根肿病品种有望从根源上抵御根肿菌对大白菜的侵染。目前已有大量根肿病抗病基因被挖掘,但大多数基因的抗性功能及作用机制尚未得到验证。本课题组前期通过差异转录组分析,找到一个在接种根肿菌后的大白菜根系中表达量显著上调的基因Bra039878。本研究根据基因注释将其命名为BrUFO,采用RT-qPCR、原位杂交和亚细胞定位等
学位
黄瓜(Cucumis sativus L.)是我国设施栽培重要的果菜,占设施蔬菜总面积近五分之一。蔬菜设施生产的专业化特点,必然要求在同一块设施土壤连续种植同样的当地主栽作物,而黄瓜是易于发生连作病害的蔬菜;同时,设施生产不合理施肥导致土壤酸化现象发生普遍,土壤酸化不仅影响植物生长发育,还加剧土传病害的发生。枯萎病是黄瓜重要的土传病害,由尖孢镰刀菌黄瓜专化型(Fusarium oxysporium
学位