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第一部分BV2小胶质细胞经典激活及替代激活的鉴定目的观察BV2小胶质细胞经典激活及替代激活后代谢分子的变化,判断鉴别M1及M2型极化小胶质细胞的方法。方法小胶质细胞以100ng/ml的LPS及20ng/mL的IL-4分别单独经典激活及替代激活24小时,以ELISA方法检测IL-12、IL-10、TNF-α的分泌量,以实时荧光定量聚合酶链反应检测iNOS、Arg-1、IL-10、IL-12的mRNA表达,以流式细胞术检测细胞膜MMr蛋白表达。结果小胶质细胞被LPS经典激活后呈M1型极化,IL-12、TNF-α分泌量、iNOSmRNA、IL-12mRNA表达量明显升高,与生理对照组比较有统计学差异(p<0.05)。小胶质细胞被IL-4替代激活后呈M2极化,IL-10分泌量、Arg-1mRNA及IL-10mRNA表达量显著升高,流式细胞术检测MMr蛋白荧光强度明显上升,与生理对照组比较有统计学差异(p<0.05)。结论小胶质细胞被经典激活呈M1型极化,替代激活呈M2型极化,不同极化状态的小胶质细胞通过检测炎性相关因子、精氨酸代谢分子及细胞膜特异性蛋白三个方面得到鉴别。第二部分Notch信号通路对BV2小胶质细胞经典激活途径及替代激活途径的调控目的研究Notch信号系统对小胶质细胞经典激活及替代激活的影响。方法1.小胶质细胞以LPS及IL-4分别经典激活及替代激活,以实时荧光定量聚合酶链反应检测Notch信号通路分子Notch、Jagged-1、Hes1、Hes5的表达。2.以DAPT阻断Notch通道后再以LPS及IL-4分别刺激小胶质细胞,以ELISA方法检测IL-12、IL-10、TNF-α的分泌量,以实时荧光定量聚合酶链反应检测iNOS、Arg-1、 IL-10、IL-12的mRNA表达,以流式细胞术检测细胞膜CD16/32及CD206蛋白表达。结果1.小胶质细胞生理对照组、LPS诱导组及IL-4刺激组均表达Notch信号通路分子,LPS诱导组Notch信号通路分子Notch1、Jagged-1、Hes1表达增强。2.以DAPT阻断Notch信号通路后,小胶质细胞IL-12、TNF-α分泌量、iNOSmRNA、 IL-12mRNA表达量较单纯LPS诱导组明显降低(p<0.05),IL-10分泌量及Arg-1mRNA表达量较单纯IL-4诱导组提高(p<0.05.),流式细胞术检测膜蛋白CD16/32较单纯LPS诱导组减低,CD206较单纯LPS诱导组增加。结论：BV2小胶质细胞在安静状态、经典激活状态及替代激活状态均表达Notch信号分子,并且经典激活状态下Notch信号通道也被活化。Notch信号系统的激活使小胶质细胞M1型极化增强,阻断Notch信号通路后,BV2小胶质细胞经典激活被抑制,M2型极化分子表达增强,表现出一定的M1型级化状态向M2型转变的趋势。第三部分辛伐他汀对BV2小胶质细胞Notch信号通路的影响目的观察辛伐他汀对于BV2小胶质细胞Notch信号通路的影响。方法部分小胶质细胞以20ug/mL的辛伐他汀预处理后再给予100ng/ml的LPS刺激,部分细胞给予0.5μg/ml可溶性Jagged1/Fc嵌合蛋白及20ug/mL的辛伐他汀共同预处理后再给予100ng/ml的LPS刺激,以Western blot检测Notch1、Hes1蛋白的表达,以实时荧光定量聚合酶链反应检测Notch1、Jagged-1、Hes1、Hes5mRNA的表达。结果。LPS诱导组Notch1、Jagged-1、Hes1、Hes5均较生理对照组显著增加(p<0.05),而辛伐他汀干预组Notch1、Hesl的蛋白测定及Notch1、Hes1、Hes5mRNA表达均较单纯LPS诱导组降低(p<0.05),而Jagged-1无显著改变。给予可溶性Jagged1/Fc嵌合蛋白后,Notch1及Hes1mRNA表达较辛伐他汀组上升。结论LPS激活小胶质细胞Notch信号通路,而辛伐他汀抑制Notch信号通路的活性,根据可溶性Jagged1/Fc嵌合蛋白对于辛伐他汀抑制作用的逆转,判断辛伐他汀对Notch信号通路调节可能发生在细胞外水平。第四部分辛伐他汀对BV2小胶质细胞极化状态的调控目的研究辛伐他汀对于BV2小胶质细胞极化状态的调控。方法小胶质细胞给予20ug/ml及5ug/mL的高低浓度的辛伐他汀预处理,再分别给予LPS经典激活及可溶性Jagged1/Fc嵌合蛋白刺激小胶质细胞,以ELISA方法检测IL-12、IL-10、TNF-α的分泌量,以实时荧光定量聚合酶链反应检测iNOS、Arg-1、IL-10、IL-12的mRNA表达,以流式细胞术检测细胞膜蛋白CD206、CD16/32的表达。结果。1.辛伐他汀干预组IL-12、TNF-α分泌量、iNOSmRNA、IL-12mRNA表达量较LPS经典激活组明显降低,IL-10分泌量显著升高(p<0.05),流式细胞仪检测CD16/32蛋白阳性表达量减少而CD206表达量增加。2.辛伐他汀干预组IL-12、TNF-α分泌量、iNOSmRNA、 IL-12mRNA表达量较Jagged1/Fc嵌合蛋白刺激组亦明显降低,Arg-1及IL-10表达量显著升高(p<0.05)。结论辛伐他汀抑制LPS诱导的小胶质细胞经典激活,同时也能抑制Notch信号激活剂Jagged1/Fc嵌合蛋白诱导的小胶质细胞经典激活,提示辛伐他汀通过介导Notch信号途径调控小胶质细胞的极化状态。