论文部分内容阅读
目的通过蛋白质组学技术对卵巢癌淋巴结定向高转移和非定向转移细胞间差异表达蛋白质进行分离,鉴定,并验证ERAP1、MRPS27、H3F3A、BFSP等四个差异蛋白在卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞亚系的表达情况。方法分别通过二维液相结合质谱和纳升HPLC联合电喷雾串联质谱两种蛋白质组学技术筛选出卵巢癌淋巴结定向高转移和非定向转移细胞间差异表达蛋白。采用TRIZOL一步法抽提卵巢癌不同淋巴结转移能力细胞的总RNA,逆转录合成CDNA,实时荧光定量PCR技术对ERAP1、MRPS27、H3F3A.BFSP等四个差异表达的蛋白在不同细胞亚系的表达进行定量分析。结果二维液相结合质谱鉴定出卵巢癌淋巴结定向高转移和非定向转移细胞间差异蛋白13个：Apolipoprotein E receptor 2, Huntingtin interacting protein, Adipocyte-derived leucine aminopeptidase variant, AF039655NID, H3 histone, family 3A, SH2D1A protein, BFSP1 protein, AF090938NID, hypothetical protein, Poly(A) binding protein, Candidatus Pelagibacter ubique HTCC1002, AX973019NID。纳升HPLC联合电喷雾串联质谱鉴定出差异蛋白共14个,分别是HNRH3(不均一核糖核酸核内核糖核蛋白体),趋化因子CXCL1, Galectin-7(Gal-7)半乳糖凝集素7,MRP-14(移动抑制因素相关蛋白),Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(甘油醛-3-磷酸脱氢酶),SCCA-1(鳞状细胞癌抗原1),Calmodulin-like protein 5(钙调节蛋白5),Alpha-enolase(烯醇化酶1),CathepsinD(组织蛋白酶D),Heat-shock proteinbeta-1(热休克蛋白),Annexin A2(膜连蛋白A2),Protein POF 1B(卵巢功能早衰蛋白),荧光定量PCR结果表明：ERAP1、H3F3A、MRPS27基因在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3、KOV3-PM4细胞系中的表达呈下降趋势,BFSP1基因的表达量在SKOV3、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3、SKOV3-PM4细胞系无明显差异。与PF-2D结合ESI-MS质谱鉴定的结果不相符。结论经过PF2D分离获得的差异蛋白混合度较高,未经过进一步分离直接质谱鉴定结果不太可靠,而再经过纳升HPLC进一步分离后进行质谱鉴定结果较理想。差异蛋白涉及到组织蛋白酶、基质金属蛋白酶及蛋白酶抑制剂、细胞粘附／细胞-基质作用因子和信号转导通路等方面。其中ERAP1、SH2D1A、H3F3A、SFRP1表达下调与卵巢癌的淋巴结定向高转移过程密切相关。