【摘 要】
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目的观察NFBD1在电离辐射诱导的DNA损伤反应中的作用,从而分析NFBD1对鼻咽癌放射敏感性的影响,并初步探讨其分子机制。方法以慢病毒感染的方法将特异性针对NFBD1基因的shRNA转
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目的观察NFBD1在电离辐射诱导的DNA损伤反应中的作用,从而分析NFBD1对鼻咽癌放射敏感性的影响,并初步探讨其分子机制。方法以慢病毒感染的方法将特异性针对NFBD1基因的shRNA转入鼻咽癌细胞,并用嘌呤霉素筛选获得稳定表达的单克隆细胞,采用FCM、克隆形成及彗星实验检测抑制NFBD1联合电离辐射对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响,用免疫荧光、激光共聚焦及Western blot检测抑制NFBD1对电离辐射诱导的DNA损伤修复方式的影响,并初步探索其分子机制。结果NFBD1-shRNA慢病毒载体感染后,鼻咽癌细胞中NFBD1mRNA和蛋白表达水平明显降低。沉默NFBD1联合电离辐射明显提高了细胞的凋亡率及有效抑制细胞的生长(p<0.05),并导致G2/M checkpoint的失活,彗星实验显示沉默NFBD1延迟了电离辐射诱导的DNA损失修复,而免疫荧光结果表明沉默NFBD1抑制了电离辐射诱导的非同源末端链接和同源重组修复方式,沉默NFBD1也明显降低了电离辐射诱导的γ-H2AX、p-ATM、Rad51、DNA-PKcs蛋白表达。结论采用慢病毒感染的方法靶向抑制NFBD1基因可稳定沉默NFBD1的表达,沉默NFBD1基因联合电离辐射可提高鼻咽癌细胞的放射敏感性、G2/M checkpoint失活及延迟DNA损伤修复,并抑制了非同源末端链接和同源重组的修复方式,其分子机制可能是沉默NFBD1打破了NFBD1、γ-H2AX和p-ATM三者构成的正反馈循环,抑制了DNA损伤信号的放大及传导,从而提高了鼻咽癌细胞的放射敏感性。
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