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目的: 研究显示Numb是参与肿瘤信号转导途径的重要成分,α-catenin的异常表达在肿瘤的发生、发展中具有重要意义。本研究检测Numb及α-catenin在胃癌组织及配对正常胃粘膜中的表达,分析Numb和α-catenin在胃癌组织中表达的相关性,并分析两者与胃癌临床病理因素的关系以及两者在胃癌发生发展中的作用及意义。 方法: 临床病理资料及组织芯片制作:收集中国医科大学附属第一医院外科手术切除胃癌组织113例,其中107例为同时收集距癌灶边缘大于5cm处正常胃黏膜作为对照以及肠上皮化生56例。常规组织蜡块行4um组织切片,常规HE染色,用于目标组织的定位。免疫组化染色及判定方法:采用PV9000免疫组化二步法检测胃癌及癌前病变中Numb和α-catenin的表达。兔抗人Numb多克隆抗体(克隆号:ab14140,工作浓度为1∶400)购自美国abeam公司和兔抗人Alpha Ecatenin多克隆抗体(工作浓度为1∶200)购自美国proteintech公司,PV9000免疫组化检测试剂盒和氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒购自北京中杉生物有限公司。采用组织芯片制作仪构建胃癌及癌前病变组织芯片蜡块,行4μm连续切片。采用柠檬酸修复液(pH6.0)高温高压修复抗原,PBS替代一抗做阴性对照。结果判定方法:Numb蛋白阳性反应为棕黄色颗粒定位于细胞膜,α-catenin蛋白阳性反应为棕黄色颗粒主要在细胞膜,少数在细胞桨。每个病例由两位观察者采用盲法随机选择2个高倍视野,计数200个细胞,染色强度(A)以阳性细胞呈色反应为准:无特异性着色为0分,浅棕色为1分,棕黄色为2分,深棕色为3分;染色的阳性细胞所占比例(B)按下列标准评定记分:阴性细胞或阳性细胞<5%为0分,阳性细胞占5~25%为1分,阳性细胞占26%~50%为2分,阳性细胞51%~75%为3分,阳性细胞>75%为4分。两种评分相乘(A×B),将结果分为:0分为阴性(-);1~4分为弱阳性(+);5~8分为中度阳性(++);9~12分为强阳性(+++)。 结果: Numb蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(67/110,60.91%)显著低于正常胃粘膜(97/97,100%)、肠上皮化生(55/56,98.21%)的阳性表达率,P<0.05;Numb在肠上皮化生与正常胃粘膜的阳性表达比较未见统计学差异(P>0.05)。Numb蛋白的阳性表达率在Lauren分型肠型胃癌组(80.77%,42/52)显著高于弥漫型胃癌组(43.10%,25/58),P<0.0001。高中分化组Numb蛋白的阳性表达率(42/51,82.35%)高于低分化组(20/48,41.67%)的阳性表达率(P<0.05)。Numb的表达与患者的年龄、性别、Borrmann分型、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期无关,P>0.05。 α-catenin蛋白在胃癌组织中的阳性表达率(86/113,76.11%)显著低于正常胃粘膜(107/107,100%)、肠上皮化生(47/47,100%)的阳性表达率,P<0.05;α-catenin在肠上皮化生与正常胃粘膜的阳性表达比较未见统计学差异(P>0.05)。BorrmannⅠ+Ⅱ型(10/13,84.62%)和BorrmannⅢ型(73/93,78.49%)胃癌中α-catenin蛋白的阳性表达率显著高于BorrmannⅣ(2/7,28.57%)中的表达(P<0.05)。α-catenin蛋白阳性表达率在肠型胃癌组(90.74%,49/54)显著高于弥漫型胃癌组(62.71%,37/59),P<0.005)。高中分化胃癌组α-catenin蛋白的阳性表达率(48/53,90.57%)高于低分化组(33/50,66%),P<0.05。但是,α-catenin在细胞膜中的表达与患者的年龄、性别、浸润深度、淋巴结有无转移及TNM分期无关,P>0.05。 109例胃癌组织中Numb的表达与α-catenin表达呈正相关,(rk=0.184,P<0.05)。 结论: 与正常胃粘膜相比,在胃癌组织中存在着Numb蛋白表达和α-catenin蛋白表达的下调,且在胃癌组织中分化程度越低,两者表达越低。胃癌中Numb蛋白的表达与胃癌的Lauren分型相关,α-catenin蛋白的表达与胃癌的Borrmann分型及Lauren分型相关。Numb和α-catenin可作为细胞分化程度的标志,在分化程度低的胃癌组织中两者表达显著下调,提示两者可能通过某些通路参与调控胃癌的组织学分化;胃癌组织中Numb蛋白表达与α-catenin表达呈正相关,提示Numb蛋白可能通过α-catenin调节途径参与Wnt/β-catenin通路,进而在促进胃癌细胞增殖及肿瘤细胞侵袭及转移中发挥重要作用。