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河北省是我国苹果生产大省,苹果树腐烂病在我国各苹果产区普遍发生,经常造成毁园,导致严重的经济损失。目前,河北省腐烂病菌种类尚不明确,且缺乏诊断无症状树体是否带菌的准确、灵敏的检测方法。本研究通过对ITS基因序列进行分析,初步明确了河北省苹果树腐烂病菌的种类和系统进化情况;建立了苹果树腐烂病菌巢氏PCR检测体系,初步揭示未显症果树带菌组织部位及显症果树病疤周围带菌情况。为苹果树腐烂病准确诊断和有效防治提供了理论依据。主要研究结果如下:1、明确了河北省苹果树腐烂病菌的种类。以采自河北省9个市12个县(区)的具有不同菌落颜色的31株腐烂病菌为研究对象,采用真菌通用引物ITS1/ITS4对ITS基因进行PCR扩增、测序并构建系统发育树,分析河北苹果树腐烂病菌种类。31株腐烂病菌菌株r DNA-ITS序列长度范围为542~563 bp,Blast分析表明,20株为Valsa ceratosperma,11株为Valsa mali var.mali,系统进化树分析表明河北省苹果树腐烂病菌全部与Valsa mali var.mali,Valsa mali和Valsa cerastosperma聚在同一分支,属于同一种群。证明了供试河北省苹果树腐烂病菌为Valsa mali。2、建立了苹果树腐烂病菌巢氏PCR检测体系。首先通过比较改良CTAB法、快速盐提法、试剂盒法提取DNA浓度、纯度、电泳及PCR扩增效果,确定了适合苹果组织带菌检测的DNA提取方法。通过引物的设计、引物特异性测定、扩增体系的优化、灵敏度测定、可靠性验证构建了苹果树腐烂病菌的巢氏PCR检测体系。结果表明,改良CTAB法提取DNA的浓度为102.1~734.5 ng/μL,A260/A280为2.06~2.29,电泳后有大于2000 bp的条带,随机引物进行PCR获得了清晰稳定的扩增产物,是较适合苹果树木质部和韧皮部组织基因组DNA提取的方法。建立的巢氏PCR检测体系将真菌通用引物ITS1/ITS4作为第一轮扩增引物,苹果树腐烂病菌ITS区特异引物V-F/V-R作为第二轮扩增引物,检测灵敏度达到了1 fg/μL,能够用于苹果树腐烂病田间样本检测。为苹果树腐烂病准确诊断提供了可靠的方法,为病害防治奠定基础。3、揭示了无明显症状发病苹果树不同组织部位携带腐烂病菌情况,显症果树不同类型病斑周围带菌情况。通过对不显症苹果树主干、3年生枝条、2年生枝条、1年生枝条的韧皮部和木质部组织进行带菌情况的检测,发现不显症苹果树韧皮部组织带菌率较高,达60%,而木质部组织带菌率低,仅为5%。枝条的生长时间与带菌情况未表现出明显的规律性。揭示了通过对新病斑、已治愈病斑、复发病斑这3种不同病斑周围0~6 cm,每隔1 cm韧皮部组织带菌情况进行检测,发现新病斑和复发病斑比已治愈病斑带菌范围大,至少能达到3 cm,最远的能达到6 cm,已治愈病斑可在0~1 cm处检测到病菌,最多能达到4 cm。