论文部分内容阅读
目的:采用神经行为学 组织化学等方法研究锰中毒对小鼠海马区神经细胞的影响生素E对其干预作用,并探讨其发生机制,为锰中毒的机理 预治疗提供实验依据。方法:1、动物 组:选用清洁级成年雄性健康的昆明小鼠75只,体重在18-22g(广西医科大学实验动物中心提供)。将选用的75只昆明小鼠按随机对照方法分为5组,分别是对照组(CG)、生素E组(VG)、锰中毒组(MG)、锰加生素E组(MVG)、锰加普罗布考组(MPG),每组15只。2、制作锰中毒小鼠模型:分别对锰中毒、锰加生素E组、锰加普罗布考组3组小鼠腹腔注射氯化锰(Mncl2),剂量为20mg/kg,其余2组小鼠腹腔注射等容积的生理盐水。每只小鼠注射的量为0.01ml/g,每天下午注射1次,连续注射4周。3、药物灌胃:分别对生素E组、锰加生素E组行生素E药物灌胃干预,剂量为100mg/kg,对照组和锰中毒组行等容积的橄榄油灌胃,锰加普罗布考组予以普罗布考药物灌胃,剂量为500mg/kg,每只小鼠灌胃的量是0.01ml/g,各组小鼠每天下午灌胃1次,连续给药4周。各组小鼠在相同环境下饲养,自由饮食。4、神经行为学检测:4周后用Morris水迷宫检测5组小鼠的逃避潜伏期和穿越平台次数,从而测定各组小鼠的学习记忆能力。5、免疫组织化学染色:用免疫组化的方法分别检测每组小鼠海马CA1区和DG区caspase-3、细胞色素C的表达和海马DG区nestin的表达。计算所得免疫组织化学图像的阳性细胞数,用统计软件spss16.0和Graph Pad Prism5统计分析各组小鼠Morris水迷宫所得数据和免疫组化结果。结果:1、Morris水迷宫检测结果:水迷宫检测实验有定位航行实验和空间探索实验两部分组成,定位航行实验中,与CG相比,MG小鼠的逃避潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P<0.05);与MG相比,MVG和MPG小鼠的逃避潜伏期明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);MVG和MPG小鼠的逃避潜伏期相比较,差异无统计学意义(P>0.05);CG和VG小鼠的逃避潜伏期相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在空间探索实验中,与CG相比,MG小鼠的穿越平台的次数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);而与MG比较,MVG和MPG小鼠穿越平台次数明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);MVG和MPG小鼠穿越平台次数相比无明显差别,差异无统计学意义(P>0.05);CG和VG小鼠的穿越平台次数无明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。2、免疫组织化学细胞色素C的表达:与CG相比,MG海马CA1区和D G区细胞色素C的表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);与MG相比,MVG和MPG小鼠细胞色素C的表达明显减少,有统计学差异(P<0.05);CG和VG之间海马CA1区和DG区细胞色素C表达的比较差异无统计学意义(P>0.05);同时MVG和MPG间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3、免疫组织化学caspase-3的表达:与CG相比较,MG海马CA1区和DG区caspase-3阳性细胞数明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);与MG相比,MVG和MPG小鼠caspase-3的表达减少,差异有显著性(P<0.05);而CG和VG之间比较差异无统计学意义(P>0.05);同时MVG和MPG间比较差异无统计学意义(P>0.05)。4、免疫组织化学nestin的表达:与CG相比较,MG海马齿状回nestin的阳性细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);NVG与MG相比,其nestin的表达明显增多;而MG和MPG间nestin的表达无明显差别(P>0.05);同时CG和VG间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1、生素E和和普罗布考干预均可改善锰中毒小鼠的学习记忆能力;2.锰中毒可促进小鼠脑内细胞色素C的增多,上调caspase-3的表达,从而降低小鼠的学习记忆能力;3、生素E和普罗布考可减少锰中毒小鼠细胞色素C和caspase-3的表达,减少神经细胞的凋亡;4、锰中毒可减少脑内DG区神经干细胞,生素E可增加锰中毒小鼠脑内神经干细胞的数量,而普罗布考对锰中毒小鼠脑内神经干细胞没有影响;5、生素E可能主要通过抗氧化作用,来对改善锰中毒小鼠的学习记忆能力,同时生素E通过增加锰中毒脑内DG区神经干细胞数量,对锰中毒脑损伤的修复有一定的保护作用。