利用芽孢杆菌防治鱼腥草白绢病的研究

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本研究从鱼腥草根围土壤中和叶围分离筛选对鱼腥草白绢病有拮抗作用的芽孢杆菌,经盆栽防效试验,筛选出具有较好生防效果的菌株B8。并对B8菌株进行了种类鉴定,定殖能力和抑菌谱测定,以及生物学特性和生防机制的研究。结果如下:1,从鱼腥草根围土壤中和叶围分离到400多株芽孢杆菌菌株,通过平板对峙培养筛选出具有拮抗活性的菌株43株,其中拮抗活性较好的4株菌株用于盆栽防病试验,筛选出对鱼腥草白绢病具有较好生防潜力的菌株B8。在平板对峙培养和盆栽试验中,B8菌株对鱼腥草白绢病病原菌的抑制效果分别达67.7%和56.8%。2,用利福平标记B8菌株测定其定殖能力,结果表明:该菌在鱼腥草根围土壤中的定殖能力较强,在接种后第7d达到初始菌量的1.85倍,接种后15d菌量仍为初始菌量的20.8%。3,B8菌株在NA平板上菌落呈圆形、边缘不整齐、有皱纹、白色、不透明;显微形态观察:菌体呈杆状(0.8μm×3.2μm)、产生椭圆形芽孢(0.7μm×1.7μm)、芽孢中生、革兰氏阳性;结合18项生理生化指标测定以及16SrDNA序列分析,将B8菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis Cohn)。4,对B8菌株的生物学特性研究表明:在BPY、YT、PG、YSP、LB、NA6种发酵培养基中,菌体生长最好的培养基为YPG,其次为YSP,最差为NA;产生拮抗物质最多的培养基为YSP,其次为NA,最少为BPY。选择YSP作为发酵培养基;培养12h后,B8开始产生拮抗物质,48h时菌体生长量和产生拮抗物质量均达到最佳;在25~35℃温度范围内,B8能够较好的生长且产生一定量的拮抗物质,35℃下生长最好,30℃下产生拮抗物质最多;培养基初始pH在6~9时,B8生长较好且能产生拮抗物质,pH=7时,B8生长最好,产生拮抗物质最多;250ml三角瓶装液量为20ml时,B8的生长量和产生拮抗物质的量最佳。5,对B8菌株拮抗机理的初步研究表明:B8菌株产生的挥发性物质能够抑制Sclerotium rolfsil Sacc菌丝的生长。B8菌株的发酵滤液对Sclerotium rolfsil Sacc.菌核的形成以及萌发都有一定的抑制作用。显微镜观察发现,经过该菌发酵滤液处理过后,Sclerotium rolfsil Sacc菌丝顶端膨大呈圆形、椭圆形或念珠状、畸形分支细胞壁破裂、细胞质外溢、菌丝裂解和断裂。该发酵滤液的活性物质对热以及强酸、强碱的稳定性较差。对B8菌株抗菌物质的提取和分离结果表明,该菌的拮抗物质为蛋白质,经过SDS-PAGE电泳分析,发现该拮抗蛋白的分子量在14.0kD-60.4kD之间。6,对B8菌株的抑菌谱测定结果表明,B8菌株产生的抑菌物质具有广谱性,对供试的5种病原真菌的抑制效果均达到55%以上。其中,对牛膝枝枯病菌(phoma Cyathula)的抑制效果最好,抑制率达71.43%,对玉蜀黍丝核菌(Rhizoctonia zeae Voorhees)的抑制效果最差,抑制率为55.56%。
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