口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的猪、牛、羊等偶蹄动物的一种急性接触性传染病,并能形成大范围流行,给流行国家和地区造成巨大损失。疫苗免疫是目前以至将来防控口蹄疫的主要策略之一。随着分子生物学的发展及对口蹄疫病毒基因组结构与功能的深入了解,基因工程疫苗已成为口蹄疫疫苗研发的主要方向之一。把FMDV基因组中具有主要抗原位点的基因进行原核表达,表达产物纯化后用于疫苗研制,为今后亚单位疫苗的开发提供了基础。本研究以O型口蹄疫病毒为研究对象,克隆了O型FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3编码基因,然后构建了结构蛋白VP0、VP1、VP3的克隆载体和表达载体,利用DNAstar软件预测了三种蛋白的抗原位点。通过对表达条件的优化,最后确定三种结构蛋白均以包涵体的形式表达,包涵体通过NTA His Bind亲和层析法进行纯化后用透析的方法对蛋白进行复性,蛋白浓缩、定量后,免疫小白鼠后获得抗血清,经Western-blot证明具有抗原性,即可诱导产生相应的抗体。定量后蛋白样品用双抗夹心ELISA法进行检测,结果表明测得样品的OD值均小于阳性对照值,而大于阴性对照值,而样品2组值即VP1的抗体产生的水品均高于其它样品。这与FMDV的结构蛋白中,VP1主要功能区内包含了FMDV主要的抗原位点,能诱导感染动物产生中和抗体的结论是相一致的。另外,分段表达的结构蛋白将它们两两等摩尔混合或者三种蛋白等摩尔混合均不能提高它的抗体产生水平,即混合抗原没有相互交叉作用,而使其产生抗体水平提高的作用。