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目的以机械张力诱导人正常皮肤成纤维细胞(Normal Skin Fibroblasts,SFB)建立增生性瘢痕成纤维细胞(Hypertrophic Scar Fibroblasts,HSFB)模型。方法取瘢痕切除植皮术的3例增生性瘢痕患者自愿捐赠的增生性瘢痕处和正常皮肤处真皮组织,应用组织块法体外分离培养NSFB及HSFB,取第3-8代细胞进行实验。NSFB和HSFB分别设置实验组和对照组,实验组加载0.1Hz,10%拉伸幅度的正弦波形周期性机械张力,以加载时间分为3、5、7天组;对照组细胞不加载机械张力培养相同时长。每组实验重复3次。各处理组实验结束后,倒置显微镜下观察细胞形态变化及增值情况;酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测细胞上清液中转化生长因子β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)和Ⅰ型胶原含量;SYBR Green实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR Detecting System,q PCR)检测细胞p130Crk-associated substance(P130Cas)、整合素-β1(Integrin-β1)、TGF-β1、Ⅰ型前胶原和α-平滑肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)m RNA的相对表达水平;蛋白质印记法(Western Blot,WB)半定量检测细胞P130Cas、Integrin-β1蛋白表达情况。数据以均数±标准差表示,组间比较采取单因素方差分析,两两比较采取S-N-Ka检验。P<0.05时认为差异有统计学意义。结果1)细胞形态:加载机械张力后实验组细胞增殖旺盛,排列有一定方向性。对照组细胞增殖速度较慢,排列无序,呈菊花团样。2)ELISA结果:加载5天时,NSFB实验组与HSFB对照组细胞TGF-β1、Ⅰ型前胶原分泌量比较,差异均无统计学意义(P>0.05),与NSFB对照组及HSFB实验组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。加载机械张力3天及7天时,NSFB实验组与HSFB对照组、NSFB对照组及HSFB实验组细胞TGF-β1、Ⅰ型前胶原分泌量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);加载3天时,NSFB实验组TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌量低于HSFB对照组,加载7天时,NSFB实验组TGF-β1、Ⅰ型胶原分泌量高于HSFB对照组。3)SYBR Green q PCR结果:加载3天时,NSFB实验组与NSFB对照组细胞P130Cas、Integrin-β1、TGF-β1和Ⅰ型前胶原m RNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);α-SMA m RNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。加载5天时,NSFB实验组与HSFB对照组细胞P130Cas、Integrin-β1、TGF-β1、Ⅰ型前胶原和α-SMA m RNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),与NSFB对照组及HSFB实验组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。加载7天时,NSFB实验组与HSFB对照组、NSFB对照组及HSFB实验组细胞P130Cas、Integrin-β1、TGF-β1、Ⅰ型前胶原和α-SMA m RNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4)WB结果:加载机械张力3天时,NSFB实验组与NSFB对照组P130Cas、Integrin-β1蛋白表达水平差异无统计学意义(P<0.05)。加载机械张力5天时,NSFB实验组与HSFB对照组细胞P130Cas、Integrin-β1蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),与NSFB对照组及HSFB实验组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。加载机械张力7天时,NSFB实验组与HSFB对照组、NSFB对照组及HSFB实验组细胞P130Cas、Integrin-β1蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论加载0.1Hz,10%拉伸幅度的正弦波形周期性机械张力5天时,可成功构建人HSFB模型。