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骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)是存在于骨髓基质中的多能干细胞,体外增殖能力强,在特定诱导条件下可跨胚层分化为多种细胞,如中胚层来源的骨骼、软骨、脂肪细胞.,外胚层来源的神经细胞等。因取材方便加之免疫原性弱,成为理想的组织工程种子细胞,在细胞替代治疗、基因治疗及组织器官再生中具有重要的研究意义及临床应用价值。然而BMSCs体外增殖及多向分化能力随着不断传代会逐步下降,因而使其在研究和应用领域的作用受到局限。利用端粒逆转录酶(Telomerase reverse transcriptase,THRT)基因修饰BMSCs,可使其成为具有长期持续增殖能力的“永生化”细胞,“永生化”的BMSCs可作为细胞工程和组织工程等研究领域的标准细胞,在基础研究及医学领域中可发挥更为重要的作用。本论文以绵羊BMSCs为研究对象,构建了TERT真核表达载体,转染绵羊BMSCs,经筛选得到稳定表达TERT基因的BMSCs细胞系,通过生物学特征分析及多向诱导分化与鉴定,证明经TERT基因修饰的BMSCs,可在体外正常高效增殖,并依然保持多向分化能力。主要研究结果如下：1.体外克隆获得绵羊TERT基因cDNA序列,采用pcDNA3.1-EGFP载体,经基因重组成功构建了TERT真核表达载体。2.TERT真核表达载体经脂质体转染、G418筛选、RT-PCR检测,筛选得到了稳定表达TERT基因的BMSCs细胞系。3.生长曲线表明,经7ERT基因修饰的BMSCs,比未经基因修饰的BMSCs体外增殖能力更强；TERT-BMSCs细胞表达了干细胞表面因子Oct4、Sox2和Nanog至成脂细胞和成神经细胞诱导培养,分化细胞不仅出现成脂细胞特有的脂滴、成神经细胞特有的形态和尼氏体,还表达了脂肪细胞特异基因PPAR peroxisome proliferator-activated receptor,过氧化物酶体增殖物激活受体)LEPTIN(肥胖基因)及神经元特异基因NSE (neuron-specific enolase,神经元特异性烯醇化酶)和GFAP (glial fibrillary acidic protein,胶质纤维酸性蛋白),表明TERT-BMSCs细胞仍保持跨胚层的多向分化能力。上述研究为探讨BMSCs细胞永生化机制奠定了必要的基础。