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第一部分二苯乙烯对糖尿病小鼠胃肠动力紊乱的作用及其机制胃肠动力紊乱是糖尿病长期并发症之一,其严重影响着病人的生活质量和血糖控制,促使病情恶化。胃肠动力紊乱的发病机制与氧化应激、糖基化终末产物、凋亡及神经损伤等多种因素有关,尤其是氧化应激扮演重要角色。从中药何首乌提取的活性单体二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-beta-D-glucoside, THSG)有着较强的抗氧化作用。因此,推测THSG对糖尿病胃肠动力紊乱有着一定的预防保护作用。目的：研究THSG对糖尿病小鼠胃排空和小肠推进的影响及其作用机制。方法：采用一次大剂量腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导小鼠糖尿病(diabetes mellitus, DM)模型,血糖浓度高于16.7mmol/L被认为造模成功,入围下一步实验。实验分为正常组、DM组和THSG治疗组(10,30,60mg·kg-1,1次/日),连续灌胃8周,观察各组血糖、体重、进食和饮水量情况；采用亚甲蓝法检测小鼠胃排空率及小肠推进指数；采用生物化学法分别检测回肠组织中丙二醛(MDA)含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和总超氧化物歧化酶(SOD)的活力；采用TUNEL法原位检测回肠组织细胞凋亡程度；采用免疫印染技术(western-blotting)检测回肠组织cleaved caspase-3、ERK1/2、PPAR-γ和SIRT1蛋白的表达。结果：(DTHSG治疗8周对STZ诱导的DM小鼠血糖水平、进食及饮水量增加无显著影响,但其能部分缓解DM小鼠体重的减轻。②与正常小鼠胃排空率(73.76±2.99%)比,DM小鼠明显降低至26.03±2.99%,出现胃排空延迟。THSG(10,30,60mg·kg-1)可逆转DM小鼠胃排空率的降低,分别增至70.11±4.14,70.79±3.21,72.80±2.25%。③DM小鼠小肠推进指数与正常小鼠(43.20±1.02%)比显著增加至68.71±1.61%,出现肠推进加快。THSG(10,30,60mg·kg-1)能剂量依赖性地改善DM小鼠小肠推进指数的增加,使之分别降至54.92±2.08,46.09±3.23,45.35±2.33%。④与正常组比(1.14±0.04nmol·mgprot-1),DM组小鼠回肠组织MDA含量明显升高(3.86±0.20nmol·mgprot-1); THSG (10,30,60mg·kg-1)可剂量依赖性地降低DM小鼠MDA含量的升高。⑤与正常组(485.10±14.24U·mgprot-1)相比,DM小鼠回肠组织GSH-PX活力显著降低(223.17±8.70U·mgprot-1); THSG (10,30,60mg·kg-1)可剂量依赖性地改善这种GSH-PX活力的降低,分别增至359.98±25.37,454.87±19.61,848.70±56.85U·mgprof-1。⑥与正常组(60.61±.63U·mgprot-1)比,THSG (10,30,60mg·kg-1)可剂量依赖性地增加SOD活力,分别为86.52±4.93,87.51±3.52,109.44±9.34U·mgprot-1,但始终低于糖尿病组(132.20±6.39U·mgprot-1)。⑦TUNEL结果显示,DM组小鼠回肠组织凋亡程度较正常组明显增加；THSG (60mg·kg-1)明显减轻DM小鼠凋亡细胞的程度和数量。⑧HSG (60mg·kg-1)显著抑制DM小鼠回肠组织促凋亡蛋白cleaved caspase-3表达的增多。⑨与正常组比,DM小鼠回肠组织ERK1/2蛋白磷酸化水平明显降低；THSG (60mg·kg-1)能显著提高DM小鼠ERK1/2蛋白磷酸化水平。⑩与正常组相比,DM小鼠回肠组织PPAR-γ和SIRT1蛋白表达明显降低；给予THSG (60mg·kg-1)能显著提高它们在DM小鼠的表达。结论：SIRT1和PPAR-γ蛋白表达降低以及ERK1/2相关的MAPK信号通路激活减少可能是糖尿病胃肠动力紊乱的发病机制之一。THSG通过上调DM小鼠回肠组织PPAR-γ和SIRT1蛋白表达,抑制促凋亡蛋白cleaved caspase-3表达及激活ERK1/2信号通路,发挥对STZ诱导的DM小鼠胃肠动力紊乱的保护作用。第二部分二苯乙烯苷对糖尿病小鼠肠道氮能神经的影响糖尿病氮能神经(nitregic neurons)受损是导致胃肠动力功能异常的直接原因。前述结果已证实THSG可改善DM小鼠胃排空延迟和肠推进加快,提示其改善作用可能与神经保护有关。另外,本课题组已证实THSG能增加eNOS功能,缓解炎性肠病诱发的iNOS增加,而其对nNOS(神经型一氧化氮合酶,氮能神经)的影响未报道。目的：观察THSG对DM小鼠nNOS表达的作用及其对一氧化氮(nitric oxide,NO)介导的非胆碱能非肾上腺素能(NANC, nonadrenergic, noncholinergic)舒张的影响。方法：采用一次大剂量腹腔注射STZ诱导小鼠DM模型。实验分为正常组,DM组和THSG治疗组(60mg·kg-1,一日/次,连续灌胃治疗8周)。采用免疫组织化学法检测nNOS在回肠组织的表达；通过多道生理记录仪记录由电场刺激(电压40V,频率10Hz,波宽5ms,持续10s)诱导的小鼠离体近端结肠NANC舒张活动,分别观察不同浓度THSG(0.1,1,3,10,100μM)及THSG长期预防性治疗(连续灌胃8周)对小鼠离体近端结肠NANC舒张的影响。结果：①免疫组织化学结果显示,与正常组比,DM组回肠组织nNOS表达明显减少；THSG治疗组nNOS表达较DM组显著增加。②结肠肌张力实验显示,THSG(0.1,1,3,10,100μM)对正常小鼠无明显作用,同样浓度下,它却可剂量依赖性地显著增加DM小鼠离体近端结肠NANC舒张率(%),从模型组的14.81±1.02%依次增至15.21±2.77,22.54±2.32,33.74±2.41,42.07±4.19,46.13±3.45%。与正常组比(53.64±2.00%),DM小鼠离体近端结肠NANC舒张率明显减小至14.81±1.02%,THSG长期治疗(8周)NANC舒张率显著增加至48.71±2.75%。结论：THSG可保护氮能神经,部分恢复DM小鼠离体近端结肠NANC舒张功能。