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目的分析pnc A基因不同突变位点对PZase活性的影响。方法收集142株耐多药(Multi-drug resistant,MDR)结核分枝杆菌临床分离株,包括广泛耐药(Extensive drug resistant,XDR)菌株45株、前XDR(pre-XDR)菌株41株,以及普通MDR(细菌对喹诺酮类和氨基糖苷类仍然敏感)菌株56株,应用吡嗪酰胺(Pyrazinamide,PZA)耐药试剂盒测定菌株对吡嗪酰胺的敏感性,并且对所有菌株进行pnc A基因序列测定。挑选pnc A基因存在明显极性改变的基因突变的PZA耐药菌株5株和发生pnc A基因突变的PZA敏感菌株2株,对其pnc A基因进行克隆表达并纯化蛋白,测定其活性。本研究所有实验以结核分枝杆菌试验室标准株H37Rv作为对照,以BCG作为酶活性分析的阴性对照。结果142株临床MDR菌株中,57.7%(82/142)株菌对PZA耐药;其中XDR菌株耐药比例为71.1%(32/45),pre-XDR菌株耐药比例为63.4%(26/41)。XDR和pre-XDR菌株中PZA的耐药率明显高于对喹诺酮类和氨基糖苷类仍然敏感的普通MDR菌株(42.9%,24/56)(c2=8.922,P=0.012);包括pnc A基因启动子区在内,PZA耐药菌中共有85.4%(70/82)的菌株存在pnc A基因突变,而PZA敏感株中pnc A基因突变的率为10%(6/60);以表型药敏试验结果作为金标准,依靠pnc A基因突变诊断吡嗪酰胺耐药的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为85.4%,91.7%,93.3%和82.1%。克隆表达获得的9个蛋白中,野生型pnc A基因表达的蛋白活性为37.2μmol·min-1·mg-1;存在His51Pro和His51Gln突变的蛋白活性接近为0;另外有4株蛋白的(Ala146Thr、His57Asp、Thr76Pro和His71Tyr)蛋白活性与野生型相比降低较为明显;发生78-84位核苷酸GCTGGC缺失的蛋白为不可溶蛋白。MIC检测结果和酶活性分析表明,发生基因突变的PZA“敏感株”实际上为耐药株。结论pnc A基因突变与吡嗪酰胺耐药有很好的相关性,可用于吡嗪酰胺耐药诊断,而表型药敏结果存发生误判的可能;pnc A基因突变导致PZase的蛋白活性降低或者丧失,对酶活性的影响取决于突变的位点和类型。