虫生真菌蝙蝠蛾拟青霉和枝顶孢代谢产物初步研究

来源 :云南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:buyaowenwo123456
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本研究材料为从横断山虫草Elaphocordyceps hengduanshanensis Yu&Chen分离的两种不同真菌,其中一种为枝顶孢Acremonium sp.,是横断山虫草无性型;另一种为拟青霉Paecilomyces sp.,是其伴生菌。本研究对伴生菌进行系统分类鉴定;测定多糖、甘露醇和核苷类含量,并与野生横断山虫草、冬虫夏草作对比,筛选一株伴生菌拟青霉和一株枝顶孢进行代谢产物发酵分离,主要获得以下结果:  应用形态和ITS测序对对伴生菌进行研究,发现伴生菌形态特征为瓶梗基部椭圆形膨大,向顶端渐变细或者顶端突然收缩变细成明显颈部,为拟青霉典型特征;通过测序ITS并在线BLAST及聚类分析,将伴生菌与蝙蝠蛾拟青霉聚在一支,综合形态与ITS测序将其鉴定为蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyceshepiali Chen&Dai。  应用分光光度法检测蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的多糖与甘露醇含量,将蝙蝠蛾拟青霉菌株编号(YHW1、YHW2、YHW3、YHW4)并用PPDA培养基培养菌丝体。检测后统计平均值发现,多糖含量最高的是YHW3(1.724%),含量最低的是YHW2(1.467%);而甘露醇含量最高的是YHW2菌株(7.528%),含量最低的是YHW4(5.298%)。与横断山虫草野生型相比,蝙蝠蛾拟青霉菌丝体多糖含量(6.243%)显著大于横断山虫草(1.449%);而蝙蝠蛾拟青霉菌丝体甘露醇含量(1.590%)显著小于横断山虫草(9.686%)。  应用HPLC测定4个蝙蝠蛾拟青霉菌株(YHW1、YHW2、YHW3、YHW4)菌丝体9种核苷成分含量,并与横断山虫草和冬虫夏草做比较,9种核苷是腺苷、尿苷、鸟苷、尿嘧啶、腺嘌呤、肌苷、胸苷、2-脱氧尿苷和2-脱氧腺苷。测定后统计平均值发现:4个蝙蝠蛾拟青霉菌株菌丝体的鸟苷、腺苷和尿苷含量较高;其中YHW1菌株菌丝体中有7种核苷成分含量明显高于其他三个菌株,除2-脱氧尿苷和肌苷成分外;蝙蝠蛾拟青霉菌丝体中鸟苷和腺苷平均值含量显著高于横断山虫草和冬虫夏草平均值,而其他核苷类成分都较横断山虫草和冬虫夏草低。  比较平均值发现,鸟苷含量排序是YHW1(3551.143ug/g)>YHW2(1510.725ug/g)>YHW4(1508.965ug/g)>YHW3(1501.354ug/g)>冬虫夏草(1231.511ug/g)>横断山虫草(244.930ug/g);腺苷含量排序是YHW1(2195.816ug/g)>冬虫夏草(1180.329ug/g)>YHW3(969.349ug/g)>YHW2(955.851ug/g)>YHW4(923.301ug/g)>横断山虫草(271.561ug/g);尿苷含量排序是冬虫夏草(1854.312ug/g)>横断山虫草(845.613ug/g)>YHW1(470.886ug/g)>YHW2(184.410ug/g)YHW3(208.121ug/g)>YHW4(212.560ug/g);腺嘌呤含量排序是冬虫夏草(134.946ug/g)>横断山虫草(54.812ug/g)>YHW1(49.143ug/g)>YHW3(28.802ug/g)>YHW4(25.561ug/g)>YHW2(22.824ug/g);尿嘧啶含量排序是冬虫夏草(283.658ug/g)>横断山虫草(121.464ug/g)>YHW1(38.190ug/g)>YHW3(1.377ug/g)>YHW2(11.905ug/g)>YHW4(1.377ug/g);2-脱氧腺苷含量排序是冬虫夏草(47.935ug/g)>YHW1(11.694ug/g)>横断山虫草(9.454ug/g)>YHW3(3.191ug/g)>YHW2(1.469ug/g)>YHW4(1.258ug/g);胸苷含量排序是冬虫夏草(94.085ug/g)>横断山虫草(22.180ug/g)>YHW1(9.927ug/g)>YHW4(3.925ug/g)>YHW3(3.735ug/g)>YHW2(2.115ug/g);2-脱氧尿苷含量排序是YHW4(13.937ug/g)>冬虫夏草(11.715ug/g)>横断山虫草(11.580ug/g)>YHW1(8.124ug/g)>YHW2(12.107ug/g)>YHW3(1.796ug/g);肌苷含量排序是冬虫夏草(293.110ug/g)>横断山虫草(68.973ug/g)>YHW2(8.522ug/g)>YHW1(6.263ug/g)>YHW4(4.550ug/g)>YHW3(0.905ug/g)  利用TLC法,分别从50株枝顶孢菌株和4株蝙蝠蛾拟青霉菌株中,筛选出枝顶孢YHB3菌株,利用PPDA培养基,培养菌丝体,分离代谢产物;筛选出蝙蝠蛾拟青霉YHW1菌株,利用青稞作为培养基主要成分,培养菌丝体,用于代谢产物分离。采用硅胶和凝胶柱层析技术分别分离发酵产物,在YHW1菌株发酵产物中分离得到腺苷、肌苷和甘露醇;在YHB3菌株中分离得到肌苷和尿嘧啶。
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