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BNIPL是本室功能筛选小组获得的具有细胞生长抑制作用的人类新基因。它有两种剪切体：BNIPL-1和BNIPL-2。与BNIPL-2比较，BNIPL-1仅在N端缺少了82个氨基酸。BNIPL包含一个在BNIP2和Cdc42GAP中都存在的BCH domain(BNIP2-Cdc42GAP-Homology)，另外还包含一个在Rho蛋白家族当中非常保守的arginine-patch motif。 BNIPL-1可以与MIF、GFER结合，从而抑制细胞的生长。为了深入理解新基因BNIPL-1抑制细胞生长的作用机理，我们建立了四环素调控的Hep3B-Tet-on-BNIPL-1细胞株，使BNIPL-1的表达受四环素的诱导调控。然后采用人Atlas cDNA expression array对新基因BNIPL-1在细胞内的下游调控事件进行了初步研究。588个已知基因中有15个的表达发生了改变，其中大部分是细胞生长和凋亡相关基因，半定量RT-PCR验证了杂交结果的可靠性。MTS细胞活性分析也进一步证明，BNIPL-1的过表达能够抑制Hep3B细胞的生长。提示BNIPL-1可能通过参与调节细胞增殖和凋亡通路来抑制肝癌细胞的生长。 前期实验发现，BNIPL-2可以和Cdc42GAP发生相互作用，并且抑制Cdc42GAP的活性；而且BNIPL-2中有一个重要的结构域：BCH domain，它可以诱导细胞伪足的产生，从而参与调节细胞的运动，提示了BNIPL-2可能参与细胞的运动和肿瘤转移。一方面，为了探讨BNlPL-2在肝癌发生、发展过程中的作用，我们利用人Arlas cDNAexpression array对BNIPL-2在Hep3B-Tet-on-BNIPL-2细胞内的下游调控事件进行了初步研究。15个已知基因发生了改变，其中包括参与细胞周期、细胞凋亡、信号转导和转录调控的相关分子。但是细胞增殖活性分析显示，在Hep3B细胞中，BNIPL-2抑制细胞生长的作用并不十分明显，所以我们猜测BNIPL-2只是部分参与了抑制Hep3B细胞生长的作用。另一方面，为了研究BNIPL-2在肿瘤侵袭和转移中的作用，我们在MHCC97-L肝癌细胞中过表达BNIPL-2，筛选稳定细胞株。然后通过体内体外的转移相关实验，对BNIPL-2过表达后MHCC97-L肝癌细胞株的浸润和转移能力及其具体机制进行了分析。研究证明，BNIPL-2的过表达能促进肝癌细胞的浸润、运动和黏附能力，提高裸鼠的肝内和肺转移率。BNIPL-2的过表达可以保持较高水平的Cdc42的活性结合形式(Cdc42-GTP)，促进细胞丝状伪足的形成。免疫细胞化学和Western blot分析发现，BNIPL-2过表达后，MMP-2和CD44表达均明显增高。提示BNIPL-2可能通过参与调控细胞运动，增强肿瘤细胞的侵袭和黏附能力，从而促进肿瘤的转移。 综上所述，本研究中我们探讨了BNIPL-1抑制Hep3B细胞生长的作用机理，加深了我们对BNIPL-1参与肝癌细胞生长通路的了解。然而，BNIPL-2参与Hep3B细胞生长的作用并不明显，体内体外的转移相关实验及其机制的分析，均证实BNIPL-2可以通过参与调控细胞运动、增强肿瘤细胞的侵袭和黏附能力，促进肝癌的侵袭和转移。在肝癌细胞中，BNIPL-1与BNIPL-2有着不同的功能，这可能与BNIPL-1在N端缺少了82个氨基酸有关。以上结果为我们下一步深入研究其在肝癌发生、发展和侵袭转移中的作用打下了良好的基础。