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1目的本课题通过制备符合预期要求的二氢卟吩e6（Ce6）磁性声敏脂质体,建立BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌皮下肿瘤模型,采用微透析技术为采样方法,对二氢卟吩e6磁性声敏脂质体制剂进行肿瘤局部药动学研究,以评价其在肿瘤局部的靶向性和声敏性,并弥补传统血药浓度法无法科学评价肿瘤靶向制剂的不足,同时基于血药浓度法和血液微透析法对制剂在大鼠体内的整体药动学进行研究,以全面描述药物的体内过程及靶向分布特性,为进一步深入研究声动力治疗技术相关的肿瘤靶向释药体系奠定基础。2方法2.1二氢卟吩e6分析方法的建立采用紫外分光光度法和高相液相色谱法两种方法对Ce6进行含量测定,并分别进行方法学考察。2.2二氢卟吩e6磁性声敏脂质体的制备及质量评价采用薄膜分散法制备磁性Ce6磁性声敏脂质体,对制备的Ce6磁性声敏脂质体冻干前后的包封率、粒径、电势、渗漏率及体外声敏释药特性测定以评价制剂的质量。2.3二氢卟吩e6磁性声敏脂质体大鼠体内整体药动学研究对12 h内血液探针Ce6在体外、大鼠体内微透析回收率稳定性进行考察,采用血药浓度法和血液微透析法对Ce6磁性声敏脂质体及Ce6溶液剂在大鼠体内整体药动学过程进行研究,绘制相关的药时曲线,采用DAS 2.1.1软件对药动学参数进行计算并比较分析。2.4二氢卟吩e6磁性声敏脂质体荷瘤裸鼠肿瘤局部药动学研究建立BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌皮下肿瘤模型;将线性探针植入荷瘤裸鼠皮下肿瘤组织进行肿瘤局部药动学过程,药动学实验分四组（A.Ce6溶液剂外加磁场组,B.Ce6磁性声敏脂质不加磁场组,C.Ce6磁性声敏脂质体不加磁场组;D.Ce6磁性声敏脂质体外加磁场超声组）,给药方式为腹腔注射,给药剂量为10 mg.kg-1（按Ce6计算）,以改良林格氏液为灌流液,流速为2μL·min-1,利用反透析法测定体内回收率,HPLC测量并计算药物浓度,绘制药时曲线,采用软件DAS 2.1.1计算药动学参数。3结果3.1 Ce6检测方法的建立分别建立了紫外分光光度法和高效液相色谱法检测Ce6含量的方法。就紫外分光光度法而言,在检测波长为403nm的条件下,Ce6线性范围、稳定性、回收率、仪器精密度等均符合实验要求。高效液相色谱法分析条件为:Agilent1260高效液相色谱系统,DAD检测器;检测波长为403nm;柱温为25℃;色谱柱为WondaSil C18-WR柱（4.6 mm×150 mm,5μm）;流动相为乙腈-0.2%磷酸水（50:50）;流速为1 mL·min-1。在此色谱条件下,Ce6改良林格氏液、Ce6含药血浆样品峰形尖锐且对称,出峰时间分别为5.78,6.66 min,与杂质分离度良好,其线性范围、检测限及定量限等均满足实验要求。3.2 Ce6磁性声敏脂质体的制备及质量评价采用薄膜分散法制备的Ce6磁性声敏脂质体冻干前后包封率为92.21±1.13%,91.89±0.99%,Ce6磁性声敏脂质体冻干前后粒径分别为157.90±3.66 nm、177.63±4.94nm,Zeta电势分别为-20.70±0.92 mV及-7.77±0.85 mV;在超声频率为1.0 MHz,超声强度为2.0 W/cm2,超声时间分别为2.5,5,8,12 min范围内,在2.58 min随着超声时间的增加,Ce6磁性声敏脂质体体外累计释放度逐渐增大,812 min体外累计释放度增加不明显。3.3二氢卟吩e6磁性声敏脂质体大鼠体内整体药动学研究无论是血液微透析法还是血药浓度法,Ce6溶液剂和Ce6磁性声敏脂质体经腹腔或尾静脉注射后在大鼠体内的药动学房室模型都符合二室模型。在相同剂型同种给药方式的情况下,血液微透析法的AUC、Cmax均比血药浓度法组稍大,考虑是血药浓度法需要对大鼠进行不断采血使血容量减少所导致;血药浓度法CL、MRT更大,则可能是麻醉状态下（本研究血液微透析法是在麻醉大鼠进行）机体的代谢通常会减弱所导致;其余各参数值差异不是很明显,表明微透析采样技术对动物本身的生理状态影响不大,而其操作除了血液探针的植入稍难,其样品无需再处理便可直接进高效液相色谱仪或液质联用仪检测,其样品收集过程则完全可以借助自动采样器自动采集,这进一步验证了血液微透析法在大鼠体内进行药动学研究的可行性与优越性。给予相同剂型（Ce6溶液剂或脂质体制剂）,腹腔注射给药都有一个相对短暂的吸收过程,而尾静脉给药（直接入血没有吸收过程）后血药浓度能迅速达到最大值,相对腹腔注射而言其Cmax更大,生物利用度更高,其分布相半衰期t1/2α和消除相半衰期t1/2β更短,体内滞留时间MRT0-∞更短,并能够更快速地代谢。相同给药方式（尾静脉注射或腹腔注射给药）,血药浓度法Ce6脂质体消除相半衰期t1/2β（Ce6脂质体的t1/2β是分别溶液剂的1.24,1.48倍）更长,体内滞留时间（Ce6脂质体的MRT0-∞是溶液剂的1.50,1.68倍）也更长,说明制备的Ce6脂质体能够延长药物在体内的时间,具有良好的缓释作用。3.4二氢卟吩e6磁性声敏脂质体肿瘤局部药动学研究A、B、C、D四组药物在肿瘤局部药动学分布过程均符合二房室开放模型,各组Tmax依次为2.6±0.279,1.667±0.236,1.467±0.183 h,1.734±0.149 h,A组与其他三组相比,达峰时间更慢,表明Ce6磁性声敏脂质体分布更快。C组比B组达峰时间更快,表明磁性声敏脂质体在磁场的作用下能更快速地聚集到肿瘤组织。而脂质体外加磁场溶液剂组分布相半衰期t1/2α较其脂质体组更长,消除项半衰期t1/2β较其他组都要短很多,体内滞留时间MRT0-∞值及AUC0-∞最小,说明脂质体制剂使药物分布更快,相除更慢,体内滞留时间增大（缓释）,生物利用度更高。脂质体外加磁场组比脂质体不加磁场组,t1/2α更小,t1/2β、MRT0-∞值及AUC0-∞更大,表明Ce6磁性声敏脂质体具有良好的磁靶向性,外加磁场使该其分布更快,消除更慢,体内滞留时间增长,生物利用度增加。由于外加磁场组的tmax为1.467 h,所以选择给药1 h后给予脂质体外加磁场超声组肿瘤局部超声处理,而得到的药动学参数Cmax比脂质体外加磁场组更大,且其后4 h内药物浓度对比脂质体外加磁场组更大,而其t1/2β、MRT0-∞值稍小,表明超声促进了脂质体中药物的释放（突释）。由裸鼠肿瘤局部药物浓度—时间曲线结果可知,对荷瘤裸鼠进行声动力疗法时可将Ce6磁性声敏脂质体的tmax（1.467 h）作为超声辐照时间点。裸鼠肿瘤局部药动学参数结果表明,Ce6磁性声敏脂质体具有良好的缓释性,磁靶向性,声敏突释性。4结论4.1采用紫外分光光度法能满足体外包封率、磁相应试验等含量测定要求;在既定的色谱条件下,采用高效液相色谱法,无论是血药浓度法还是微透析法,在一定浓度范围内,Ce6的浓度与其峰面积线性关系良好,方法专属性、精密度、稳定性等均能够满足本研究的检测要求,采用高效液相色谱法能准确稳定地对Ce6进行定量分析。4.2采用薄膜分散法制备的脂质体冻干前包封率、粒径、电势均变化不大,其值大小均符合预期要求,体外释放度实验表明Ce6磁性声敏脂质体具有明显的缓释与突释性（超声波激发）。4.3血液微透析法与传统血药浓度法相比,相关药动学参数差异不是很大,证实了微透析法应用到Ce6体内药动学研究的可行性和可靠性;两种方法药动学参数表明Ce6磁性声敏脂质体能够延长药物在体内的时间,具有良好的缓释作用。4.4 BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌癌细胞皮下肿瘤模型成模周期短,成瘤率高,适合微透析研究进行肿瘤局部药动学研究。4.5自制的二氢卟吩e6磁性声敏脂质体在外加磁场的条件下,能迅速地聚集到靶部位,肿瘤靶向性高。在脂质体外加磁场组Tmax超声辐照后其肿瘤局部药物浓度明显提高,这表明Ce6脂质体具有良好的声敏性（超声波可以促进Ce6脂质体释药）。4.6本课题建立了基于微透析采样技术的新型抗肿瘤药物靶向给药系统肿瘤局部药动学研究的一般研究方法,为今后结合声动力疗法肿瘤局部药动学研究奠定了基础。