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【目的】从整体、细胞及分子水平,研究中药筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经CNTF及其mRNA表达的作用,以及筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞的增殖与分泌CNTF的影响。【方法】1.整体实验制作糖尿病大鼠模型,随机分为模型对照组、筋脉通小剂量、中剂量、大剂量组及神经妥乐平组,每组10只。以体重、鼠龄及性别相匹配的正常大鼠10只作为正常对照组。筋脉通小、中、大组分别按成人剂量5倍、10倍和20倍给药;神经妥乐平组按成人剂量10倍给药。模型组和正常组予灌服蒸馏水。所有实验大鼠灌胃16w处死。检测各组治疗前及治疗后4w、8w、12w和16w的体重和血糖变化,并检测大鼠坐骨神经CNTF及CNTF-mRNA的表达。2.细胞实验体外培养雪旺细胞,S-100蛋白进行鉴定。取第3代雪旺细胞,加入DMEM、50mmolGlu培养液以及含50mmolGlu的筋脉通(JMT)和神经妥乐平(Ntp)含药血清进行培养,48h后行MTT比色试验观察雪旺细胞增殖活性的变化,采用实时荧光定量PCR法检测CNTF-mRNA的表达,以及激光扫描共聚焦显微技术检测CNTF蛋白表达水平的变化。【结果】1.整体实验(1)血糖和体重STZ-DM大鼠血糖值均显著高于正常组(P＜0.01);药物干预后,治疗组血糖在同一时间点与模型组相比无明显差异(P＞0.05);治疗组间血糖在各时间点均无明显差异(P＞0.05)。干预前后,各组大鼠的体重在同一时间点无明显差异(P＞0.05)。(2)坐骨神经CNTF表达模型组和各治疗组的积分光密度值较正常组显著下降(P＜0.01)。各治疗组积分光密度值较模型组均有显著增高(P＜0.01)。神经妥乐平组和筋脉通中、小剂量组的积分光密度值明显高于筋脉通大剂量组(P＜0.01)。(3)坐骨神经CNTF-mRNA表达模型组及各治疗组的CNTF-mRNA值均较正常组显著降低(P＜0.01)。与模型组相比,筋脉通大、中、小剂量组和神经妥乐平组的CNTF-mRNA值均有明显上调(P＜0.01)。与神经妥乐平组相比,筋脉通大、中、小剂量组的CNTF-mRNA值明显增高(P＜0.01)。2.细胞实验(1)MTT比色实验原代培养雪旺细胞在50mmolGlu环境培养48h后,OD值显著降低(P＜0.01)。与50mmolGlu组相比,JMT组与Ntp组的OD值显著升高(P＜0.05);JMT组及Ntp组比较OD值无统计学差异(P＞0.05)。(2)激光扫描共聚焦显微镜检测①50mmolGlu组及治疗组雪旺细胞CNTF的荧光强度值较正常组明显降低(P＜0.01)。②与50mmolGlu组相比,JMT组与Ntp组雪旺细胞CNTF的荧光强度值明显升高(P＜0.01)。③JMT组与Ntp组比较无显著差异(P＞0.05)。(3)QT-PCR法检测①50mmolGlu组及治疗组雪旺细胞CNTF-mRNA表达水平较正常组明显降低(P＜0.01)。②与50mmolGlu组相比,JMT组与Ntp组雪旺细胞CNTF-mRNA表达水平增高(P＜0.01)。③JMT组雪旺细胞CNTF-mRNA表达水平高于Ntp组(P＜0.05)。【结论】1.整体实验(1)造模后16周,DPN大鼠坐骨神经CNTF及CNTF-mRNA表达水平显著下降,减弱了受损神经纤维的再生修复能力。(2)筋脉通可上调DPN大鼠坐骨神经CNTF及其mRNA的表达,提示筋脉通具有防止DPN大鼠周围神经组织进一步损伤、促进受损神经纤维再生修复的功能。(3)筋脉通减轻DPN大鼠坐骨神经损伤的作用不是通过降低血糖实现的。2.细胞实验(1)高糖培养环境对雪旺细胞的增殖有明显抑制作用。(2)高糖培养环境使雪旺细胞CNTF及CNTF-mRNA表达能力明显降低。(3)筋脉通含药血清可有效促进高糖培养雪旺细胞的增殖能力,并上调雪旺细胞表达CNTF及其mRNA的水平。【创新点】从整体、细胞及分子水平,研究中药筋脉通对糖尿病大鼠坐骨神经CNTF及其mRNA表达的作用,以及筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞的增殖与分泌CNTF的影响,经检索国内外文献未见报道。