本文首先利用MTT实验方法对本课题组已经合成的喜树碱—去氧胆酸偶联物进行体外抗肿瘤活性的筛选。实验结果表明喜树碱-20(s)-O-甘氨酸酯-[N-(3’α,12’α-二羟基-24’-羰基-5’β-胆酸)](本文中简称A2)对人肝癌细胞系SMMC-7721表现出很强的体外致死能力,但是与对SMMC-7721细胞相比,A2对人结肠癌细胞系HCT-116和人乳腺癌细胞系MCF-7的体外致死能力明显降低,尤其对MCF-7的致死能力非常弱。10-(3’α,12’α-二羟基-5’β-胆酸-24’-羰基)-(20s)-喜树碱(本文中简称C2)对上述三种肿瘤细胞的体外致死能力都比较低,尤其是对SMMC-7721细胞的致死能力最弱。10-O-(3-O-(3’α,12’α-二羟基-24’-羰基-5’β胆酸)—丙烷基)-(20s)-喜树碱(本文中简称D2)对三种肿瘤细胞都有非常强的体外致死能力。由此可见A2是唯一一个有选择性的致死肝癌细胞SMMC-7721 的喜树碱—去氧胆酸偶联物,暗示 A2 可能具有良好的肝癌靶向应用方面的潜力。本研究首先通过激光共聚焦显微镜观察经吖啶橙(AO)染色的细胞,发现被A2作用的SMMC-7721细胞出现了明显的凋亡形态特征。用流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI染色的细胞,发现凋亡细胞的数量随着A2浓度的升高而增多。由此可见A2诱导SMMC-7721细胞凋亡并且表现出浓度依赖性。为研究A2进入SMMC-7721细胞的运输机制,本实验首先通过qRT-PCR技术检测A2对SMMC-7721细胞中有机阴离子转运多肽(OATPs)表达的影响,发现A2可以明显的选择性上调OATP1B3的表达量,说明A2与OATP1B3的关系紧密,OATP1B3可能参与A2的运输。随后利用药物摄取实验发现A2进入SMMC-7721细胞内的过程是依靠主动运输,协助扩散和自由扩散方式共同完成的。并且通过加入利福平和去氧胆酸等运输抑制剂证明A2的运输方式与去氧胆酸相似,并且A2通过载体的运输主要是依靠OATP1B3介导的。通过流式细胞仪对A2处理的SMMC-7721细胞进行周期分布检测发现A2使细胞周期明显的阻滞在S期和G2/M期。因此A2阻止了 SMMC-7721细胞的正常有丝分裂增殖。通过Western Blot实验发现A2使SMMC-7721细胞内的许多凋亡相关因子的蛋白表达量发生明显变化。Bak明显的被A2上调,procaspase9和procaspase3表达量被A2下调,但是不明显。AIF前体蛋白表达量被上调,并且出现了释放到细胞质中的57KD的AIF。以上结果表明A2诱导SMMC-7721细胞凋亡通过线粒体凋亡途径。