为解决二维色谱联用过程中存在的两维流动相不相溶问题,以及将第一维正相色谱馏分导入第二维反相色谱产生的进样体积过大问题,本论文第二章发展了真空溶剂蒸发接口(VEI)技术,采用该技术建立了切割模式的正相色谱-反相色谱的联用系统(VEI-2D-LC),使第一维切割组分中的正相溶剂在线高温蒸发,而被分析样品沉积在定量环内,从而实现了两维溶剂的转换、显著降低转入第二维馏分的体积。随后对该接口模式进行了改进,在第二维采用常规整体柱提高分离速度的条件下,初步建立了真空溶剂蒸发-全二维联用系统(VEI-C2D-LC),并将该系统应用于天然植物提取物的分离,证实了该系统具有自动化程度高,快速,高选择性以及高峰容量的特点。为解决由于流动相不互溶而无法实现正相色谱与反相色谱的在线联用问题,本论文在第三章设计了微柱正相色谱与常规反相色谱的全二维联用系统(C2D-LC)。采用该系统解决了第一维切割体积与第二维色谱柱最大允许进样体积间的矛盾,同时降低了两维流动相不互溶现象。为了研究色谱柱的轴向负温度梯度(ATG)对色谱分离的影响,设计了一种可以在色谱柱内产生ATG的加热装置,并采用该装置研究了微柱液相色谱的轴向温度梯度效应。结果表明色谱柱的轴向温度梯度可以使液相分离获得更好的分离效率以及更窄的色谱峰宽。为解决含水正相色谱与反相色谱联用过程中的谱带展宽问题,设计了高温正相色谱/常温反相色谱联用系统。将高温正相色谱应用于二维液相系统,第一维可采用低有机溶剂含量的流动相进行洗脱,从而降低第一维切割组分在第二维柱头的扩散,减小系统峰,提高分离度以及分离效率。