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芸薹生链格孢(Alternaria brassicicola)引起的黑斑病是十字花科蔬菜农业生产上的一大难题,早期研究显示,Fus3-MAPK信号途径在A.brassicicola的致病性过程中起到重要的调控作用,前期在信号传导特异性方面对锚定作用已进行研究,而未对其支架蛋白作用进行详细研究。本研究主要以芸薹生链格孢菌(A.brassicicola)为对象,通过构建AbSte5基因缺失突变体与野生菌对比研究,进而针对MAPK信号转导途径中的Ste5基因功能进行研究。其主要结果如下;利用酿酒酵母saccharomyces cerevisiae Ste5基因序列在建立的A.brassicicola基因组数据库中进行本地比对,找到A.brassicicola中Ste5同源基因。根据下载的Ste5基因序列,设计特异性引物从A.brassicicola中成功扩增Ab Ste5基因以及结合RT-PCR技术扩增得到cDNA,该基因全长3327bp,cDNA3276bp,含有1个内含子且符合GT-AG法则。通过SMART蛋白质功能预测网站对A.brassicicola Ste5蛋白质序列进行分析,并与来源于其它真菌中的Ste5同源基因比对发现在序列上同源性虽低,但氨基酸序列在结构上具有极高的相似性,发现都具有RING、PH以及vWA功能域,因此推测A.brassicicola中的Ste5基因也是一种支架蛋白。构建AbSte5基因缺失突变载体pUCATPH-Ab Ste5以及M13F/M13R引物扩增新构建质粒PCR产物利用PEG介导方法转化A.brassicicola原生质体,通过PCR法及RT-PCR技术进一步验证并筛选得到了AbSte5基因缺失突变体,并通过southern杂交技术得出基因单拷贝插入缺失。在菌落表型、菌丝和分生孢子形态、黑色素以及致病性检测上将AbSte5基因缺失突变体与野生菌进行比较研究。结果发现AbSte5基因缺失突变体在PDA上生长速度下降,而且不能产生分生孢子,当采用离体叶片接种法接种未人工刺伤白菜叶片时,Ab Ste5基因缺失突变体不能侵染白菜叶片,当接种刺伤白菜叶片时,亦丧失致病力。扩增AbSte5全基因以pCB1532质粒为载体构建互补载体转化AbSte5突变菌株原生质体得到互补体后,其生物学性状等均恢复到野生菌水平。由此可以推测,AbSte5基因与菌丝形态、分生孢子的形成、致病性等有密切的关系。