绿原酸对奶牛乳腺上皮细胞的保护作用及对中性粒细胞功能的影响

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本文主要研究了绿原酸对金黄色葡萄球菌感染的乳腺上皮细胞的保护作用及绿原酸对奶牛中性粒细胞功能的影响。试验一、绿原酸对金黄色葡萄球菌与奶牛乳腺上皮细胞相互作用的影响研究0、10、20、30 μg/mL绿原酸对金黄色葡萄球菌增殖的抑制作用。结果显示培养0、3、6 h时绿原酸对金黄色葡萄球菌的增殖没有显著影响,培养9、12 h时30 μg/mL绿原酸组对金黄色葡萄球菌增殖具有显著的抑制作用(P<0.05)。培养24h时10 μg/mL绿原酸组对金黄色葡萄球菌增殖具有显著的抑制作用(P<0.05),20、30μg/mL绿原酸组对金黄色葡萄球菌增殖具有极显著的抑制作用(P<0.01)。20μg/mL绿原酸可以对已形成的细菌生物膜起到破坏作用(P<0.05),其他组无显著影响。10、20、30μg/mL绿原酸对乳腺上皮细胞活性无负面影响,20 μg/mL绿原酸组可以显著提高金黄色葡萄球菌感染的乳腺上皮细胞的存活率(P<0.05),其他组无显著影响。10、20、30 μg/mL绿原酸对金黄色葡萄球菌粘附侵袭乳腺上皮细胞没有显著影响,但30 μg/mL绿原酸组可以显著降低金黄色葡萄球菌对乳腺上皮细胞的侵袭率(P<0.05)。30 μg/mL绿原酸组可以显著降低金黄色葡萄球菌诱导的乳腺上皮细胞ROS的产生(P<0.05),其他组无显著影响。试验二、绿原酸对金黄色葡萄球菌诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎症反应的影响为探究绿原酸对乳腺上皮细胞炎症相关因子表达的影响,利用金黄色葡萄球菌感染乳腺上皮细胞后加入绿原酸进行培养,结果显示30 μg/mL绿原酸可以极显著降低IL-1β、IL-6、IL-8、TLR-2mRNA 的表达(P<0.01),对 TNF-α、MyD88mRNA 的表达无显著影响。30 μg/mL绿原酸组可以显著降低MAPK信号通路p38、JNK蛋白的磷酸化水平,对ERK亚族的磷酸化没有影响。试验三、绿原酸对中性粒细胞功能及炎症相关基因表达的影响为探究绿原酸对中性粒细胞功能的影响,对中性粒细胞的趋化、吞噬、杀菌功能进行评价。分别选用0、10、20、30 μg/mL绿原酸与中性粒细胞共培养,结果显示10、20、30 μg/mL绿原酸对中性粒细胞活性没有影响,10、20、30 μg/mL绿原酸对中性粒细胞的趋化能力没有影响,20μg/mL绿原酸组可以显著提高中性粒细胞的吞噬能力(P<0.05),30μg/mL组可以极显著提高吞噬能力(P<0.01)。添加20μg/mL绿原酸组中性粒细胞的杀菌能力显著提高(P<0.05),其他组无显著影响。为探究绿原酸对中性粒细胞炎症相关因子表达的影响,对趋化实验下室的中性粒细胞基因表达进行分析,结果显示,30μg/mL绿原酸组可以降低中性粒细胞IL-1β、TLR-2mRNA的表达(P<0.05),但对TGF-β、IL-8 mRNA的表达无显著影响。
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