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目的：肿瘤干细胞与肿瘤的化疗抵抗有关,本研究主要探索溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF对化疗富集小鼠4T1乳腺癌干细胞的杀伤作用,以及分析溶瘤病毒联合化疗治疗荷瘤鼠的效果,为指导临床应用奠定基础。方法：用Aldefluor荧光底物标记4T1小鼠乳腺癌细胞,通过流式细胞仪检测或分选出ALDHbr细胞及相对应的ALDHlo细胞,分别用体外成球实验及体内成瘤实验两种方法分析4T1ALDHbr细胞的肿瘤干细胞特性。通过Western blot的方法证明4T1ALDHbr细胞具有化疗耐药性,然后通过体外加药处理及体内治疗等实验证明溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF对这群细胞的杀伤作用。进而观察溶瘤病毒联合阿霉素化疗治疗荷瘤小鼠效应。结果：流式细胞仪分选出来的4T1ALDHbr细胞具有肿瘤干细胞的特性,表现如下：与4T1ALDHlo细胞相比,4T1ALDHbr细胞在体外无血清球培养条件下具有更强的形成非贴壁细胞球的能力及在同系Balb/c小鼠体内具有更强的形成肿瘤的能力。在普通4T1细胞群体中,ALDHbr细胞所占比例约为13%。4T1ALDHbr具有化疗抵抗性,表现为用化疗药物阿霉素体外处理4T1普通细胞24小时后明显富集其中的ALDHbr细胞,以及流式细胞仪分选的4T1ALDHbr细胞中耐药蛋白P-gp的表达明显高于相对应的ALDHlo细胞。与化疗药物不同的是,在体外用溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF处理4T1细胞24小时后,不会引起4T1ALDHbr细胞的富集,即它可以均一性地杀伤ALDHbr和ALDHlo两群细胞。在体内实验中,Balb/c荷瘤鼠用溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF瘤内注射治疗后,与对照组相比,原发肿瘤组织中4T1ALDHbr细胞的比例降低更明显(p<0.05)。而且,阿霉素全身化疗后序贯应用溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF瘤内治疗较单独阿霉素或溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF治疗组取得更强的肿瘤生长抑制作用及进一步延长4T1荷瘤鼠的中位生存期。结论：该研究应用4T1小鼠肿瘤模型,证明了溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF对于肿瘤普通群体和化疗耐药富集的干细胞群体具有同样的杀伤效率。并且,证明了溶瘤病毒HSV1-hGM-CSF与化疗联合应用治疗肿瘤会获得更好的疗效。