白簕茎多糖的分离纯化及其降糖活性研究

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白簕(Acanthopanax Trifoliatus(Linn.)Merr.),为五加科(Araliaceae)五加属(Acanthopananx)灌木植物。本论文以干燥白簕茎为原料,对其多糖成分进行提取、分离纯化,进行白簕茎多糖的降糖药理活性实验,为天然降血糖活性物质的进一步研究奠定基础,为白簕植物资源的综合开发利用提供依据。本实验的主要研究内容如下:1.采用苯酚-硫酸法测定测定多糖含量,考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,并对含量测定方法进行了方法学考察,两种含量测定方法的线性范围、精密度、重复性、稳定性、加样回收率均良好。通过水提醇沉法制备白簕茎粗多糖(ATP),测得ATP的多糖含量为28.5%,蛋白质含量为1.1%。2.ATP通过Sevag法脱蛋白,在反复萃取4次后,蛋白去除率为78.21%,多糖保留率为84.57%。比较了活性炭吸附、双氧水、不同极性大孔树脂的静态吸附脱色效果,综合考虑脱色率与多糖保留率,最终选择了以HPD-600树脂作为脱色剂。在单因素实验基础上,利用正交设计法优化HPD-600大孔树脂的脱色工艺,获得最佳脱色条件为:多糖溶液浓度pH值为4,液固比为30:1(mL:g),吸附时间为4 h。在此条件下,脱色率达到80.09%,平均多糖保留率为87.91%。3.脱蛋白、脱色素后的ATP经DEAE-52纤维素柱层析分离,得到3个多糖组分,分别为中性多糖ATP1,酸性多糖ATP2、ATP3。通过液相柱前衍生化法分析3个多糖组分中水解产物的单糖组成,分析结果表明,ATP1由6种单糖组成:甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖与阿拉伯糖;ATP2由7种单糖组成:甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖与阿拉伯糖;ATP3则由6种单糖组成:鼠李糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖与阿拉伯糖。ATP1经Sephadex G50柱层析分离得到均一多糖GATP1,经HPGPC分析,GATP1色谱峰分布宽度D=1.02,数均分子量Mn=2270,重均分子量Mw=2310。气相柱前衍生化法测定GATP1中单糖组成的摩尔比为鼠李糖:甘露糖:葡萄糖:半乳糖:肌醇=0.63:0.56:5.52:0.62:1.00。4.建立链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病小鼠模型,考察ATP与脱色多糖的降糖药理活性。考察ATP对小鼠体重、血糖、糖耐量以及糖原含量的影响,对胰腺、脾脏进行HE染色观察;并考察脱色多糖对小鼠血糖与体重的影响。ATP和脱色多糖均可有效降低试验性糖尿病小鼠的血糖,且存在一定的剂量相关性,中高剂量组的多糖在脱色前后对糖尿病小鼠的治疗效果接近临床经典药物二甲双胍,ATP与脱色多糖高剂量组在给药2周后,抑制率分别为32.02%、43.04%,提示脱色多糖在相同剂量下降糖作用略有增强。ATP可显著提高糖尿病小鼠的糖耐量,肝、肌糖原含量。HE染色观察发现ATP给药后,各组小鼠的胰岛损伤有不同程度的恢复,同时可增强小鼠脾脏免疫功能。
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