本文通过原代培养新生乳鼠肝细胞模型，运用细胞培养、荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜和生化分析等生物学技术，系统研究了镉负荷诱发肝细胞损伤以及肝细胞存活性、胞内MDA含量、Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase和Na⁺-K⁺-ATPase活性以及胞内Ca_i²⁺含量的变化，细胞培养上清液中LDH及AST的活性、白蛋白及Ca²⁺含量变化，较为深入地探讨了镉导致的肝细胞胞内Ca_i²⁺稳态失衡的可能机制；同时，还观察了硒干预镉诱发鼠肝细胞存活及其MDA含量和培养液中LDH活性的变化以及硒对镉暴露肝细胞内Ca²⁺稳态变化的影响。结果如下： 1 新生乳鼠肝细胞原代培养方法的建立 无菌分离新生乳鼠肝脏组织，采用胶原蛋白酶消化法分离肝细胞并使用无血清培养液HepatoZYME-SFM对其进行体外培养，通过形态学及台盼蓝染色法鉴定，分离的肝细胞细胞完整，呈球形或椭球形，存活率在90％以上。说明该方法是比较理想的肝细胞培养法，为科学研究提供了细胞模型平台。 2 镉诱发肝细胞毒性及其胞内游离Ca²⁺变化研究 原代培养乳鼠肝细胞，分为三个镉处理组和正常对照组，分别加入5、10、25μM CdCl₂染毒以及等量D-hank’s溶液。结果显示：实验后12h，CdCl₂导致肝细胞存活剂量依赖性下降；培养上清液LDH和AST的活力升高或显著升高，并且白蛋白含量大大降低。在CdCl₂暴露12h后，细胞内MDA生成量增加处于较高水平，培养上清液Ca²⁺含量显著下降。进一步观察显示，在CdCl₂暴露12h和24h后，肝细胞[Ca²⁺]_i显著升高：胞内Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶及Na⁺-K⁺-ATP酶活力12h与对照组无明显差异，至24h下降或明显下降。提示：CdCl₂通过诱导肝细胞脂质过氧化和损伤，引发细胞存活下降和功能障碍而导致强烈毒性；镉暴露引发肝细胞[Ca²⁺]_i异常增加可能是细胞损伤发展的重要机制，部分[Ca²⁺]_i升高与胞外Ca²⁺的进入有密切关系。 3 镉诱发肝细胞胞内游离Ca²⁺堆积的机制探讨 原代培养乳鼠肝细胞，用Fluo-3／AM对生长良好的原代培养肝细胞闭光孵育，然后清洗并重悬肝细胞于有钙HBSS或无钙HBSS中，同时设计加或不加2-APB抑制剂（100μM）的情况，用激光共聚焦显微镜观察CdCl₂（10μM）急性暴露引起的胞内钙离子荧光强度变化。结果显示：在仅有钙的HBSS中，CdCl₂诱导肝细胞[Ca²⁺]_i明显上升，包括开始的缓慢上升期和随后的持续升高期；在有钙的HBSS+2-APB中，CdCl₂仅引起一个无开始上升期的缓缓升高；在无钙的