【目的】研究千层纸素A对三阴型乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖抑制作用及其凋亡、自噬机制。【方法】(1)利用网络药理学预测千层纸素A在三阴型乳腺癌中的作用靶点,并进行功能富集分析和通路富集分析。(2)用0、200μM千层纸素A分别处理MDA-MB-231细胞24小时后,用光学显微镜观察细胞数量及形态变化判断其是否具有抑制增殖的作用。(3)用0、50、100、150、200μM的千层纸素A分别处理MDA-MB-231细胞24、48、72小时后,用CCK-8法检测药物对细胞的增殖抑制率。(4)用0、100、150、200μM千层纸素A分别处理MDA-MB-231细胞24小时,用150μM浓度的千层纸素A处理细胞24、48、72小时后,通过Annexin V-FITC和PI双染色法进行流式细胞分析检测细胞的凋亡程度。(5)利用RT-PCR法检测BAX、BCL2、BECN1基因的表达水平变化,通过Western blotting法检测BAX、BCL2、BECN1蛋白的表达水平改变。【结果】(1)网络药理学分析结果表明千层纸素A在三阴型乳腺癌中的作用靶点共有12个,富集分析结果表明千层纸素A作用于细胞多条信号通路执行多种生物学功能。(2)显微镜观察结果表明用千层纸素A处理后,实验组贴壁活细胞数量更少,且部分细胞形态改变。(3)用不同浓度千层纸素A培育细胞不同时间后,CCK-8结果表明,各浓度组与对照组相比,细胞增殖受到明显抑制(P<0.01);各时间组与对照组相比,48h组从100μM浓度开始,细胞增殖受到抑制(P<0.05),72h组从50μM浓度开始,细胞增殖就受到明显抑制(P<0.05);其24小时半数抑制率是(146.66±7.59)μM。(4)流式细胞分析结果显示千层纸素A促进了细胞的凋亡,各浓度组和时间组与对照组相比,凋亡细胞比例明显增加(P<0.05);RT-PCR和Western blotting结果表明千层纸素A促进BAX和BECN1表达,抑制BCL2的表达,上调BAX/BCL2水平(P<0.05)。【结论】千层纸素A通过上调BAX、下调BCL2的表达,使BAX/BCL2的比值增加,诱导MDA-MB-231细胞的凋亡,并且上调BECN1基因表达,促进MDA-MB-231细胞的自噬,且其作用呈浓度依赖性和时间依赖性。