目的：　　 KIF4是KIFs家族中一员，是一类以氨基末端为驱动结构域的驱动蛋白。阿霉素是治疗乳腺癌常用的有效化疗药物之一。低剂量的阿霉素常常诱导肿瘤细胞衰老，这有助于降低药物的多药耐药（MDR）现象。探讨KIF4A在阿霉素处理的人乳腺癌细胞MCF-7表达的变化，有助于进一步阐明KIF4A的功能及其与阿霉素诱导的肿瘤衰老的关系。　　 方法：　　 接种MCF-7细胞于培养皿，次日用1μmol·L-1的阿霉素处理细胞2小时，对照不处理，后换以10％胎牛血清的DMEM于37℃、5％CO2继续培养细胞。分别于阿霉素处理后第12、24、48、72、96小时，用RIPA裂解缓冲液裂解细胞收集蛋白，用Bradford方法测定蛋白浓度，取等量（25μg）蛋白进行Westernblot检测。用抗KIF4A抗体检测KIF4A，用β-微管蛋白作为上样对照（loadingcotrol）。将Western blowing的结果用Image-Pro Plus6.0软件进行光密度分析，之后将各蛋白条带的光密度值用于下列公式计算KIF4A蛋白表达抑制率：KIF4A蛋白表达抑制率（％）=100％x[（未处理组KIF4A蛋白/β-微管蛋白）-（处理组KIF4A蛋白/β-微管蛋白）]/（未处理组KIF4A蛋白/β-微管蛋白）。　　 接种MCF-7细胞于培养皿，次日分别用0、0.05、0.1、0.5、1、2μmol·L-1的阿霉素处理细胞2小时，后换以10％胎牛血清的DMEM于37℃、5％CO2继续培养细胞。于阿霉素处理后第96小时取出培养皿，收集蛋白，行蛋白浓度测定，取等量蛋白行Western blot检测。用Image-Pro Plus6.0软件进行光密度分析，并且计算KIF4A蛋白表达抑制率。　　 用PCR扩增KIF4A基因完整开放读码框架（ORF），并将其与pEGFP-C1连接，形成KIF4A的真核表达质粒pEGFP-KIF4A。在35mm培养皿内，将pEGFP-KIF4A和作为对照的pEGFP-C1质粒用LipofectaminTM转染入MCF-7细胞中。20-24小时后，用阿霉素处理，而后置于荧光显微镜下观察KIF4A的表达及分布。　　 接种适量的MCF-7细胞于培养皿，次日用1μmol·L-1的阿霉素处理细胞2小时，对照不处理，后换以10％胎牛血清的DMEM于37℃、5％CO2继续培养细胞。于阿霉素处理后第96小时，取出培养皿，行衰老相关半乳糖苷酶染色，次日于倒置显微镜下观察衰老细胞，计算衰老染色率（染色阳性细胞数/计数的总细胞数）。　　 结果：　　 阿霉素处理后不同时间段收集蛋白行Western blot检测结果分析发现，在处理后第12、24和48h，阿霉素虽可抑制KIF4A蛋白表达，但其抑制作用并不十分明显，KIF4A蛋白与β-微管蛋白光密度比值分析显示，其表达的抑制率仅介于20％～35％之间；而在72和96h，阿霉素处理的MCF-7细胞表达KIF4A显著降低，其表达的抑制率均高达65％以上，其中，尤以96h最明显。　　 用不同浓度的阿霉素处理MCF-7细胞，96h后收集蛋白行 Western blot检测结果分析发现，虽然0.1μmol·L-1以下浓度的阿霉素对KIF4A蛋白表达无明显影响，但0.5μmol·L-1及以上浓度的阿霉素均可显著降低KIF4A蛋白水平，KIF4A蛋白与β-微管蛋白光密度比值分析显示其表达的抑制率均高达50％以上，并且呈浓度依赖性。　　 pEGFP-KIF4A质粒构建成功，将其转染入MCF-7细胞高表达KIF4A，镜下观察带有绿色荧光的KIF4A蛋白主要分布在细胞核，呈圆形或椭圆形，核仁未见分布。用阿霉素处理之后，其分布未见改变。　　 与未用阿霉素处理的MCF-7细胞相比，用1μmol·L-1的阿霉素处理2小时的MCF-7细胞的衰老相关半乳糖苷酶染色率由5％提高到42％，细胞核周边出现蓝染区域，细胞呈衰老样变：体积变大，扁平，胞浆颗粒增多，富含液泡。　　 结论：　　 阿霉素处理MCF-7细胞可使KIF4A蛋白表达水平降低，且有浓度依赖性。阿霉素对高表达的KIF4A在MCF-7细胞中的分布没有影响。阿霉素处理的MCF-7细胞衰老阳性率提高。KIF4A蛋白表达降低与阿霉素引起MCF-7细胞衰老的关系有待进一步研究。