锚蛋白含有由锚蛋白重复模体组成的锚蛋白重复结构域,能介导蛋白质与蛋白质的相互作用,实现纷繁复杂的生物功能。在拟南芥中,至少有108个锚蛋白基因。实验室的前期工作证明锚蛋白基因家族的一个成员,ANK6,在植物受精过程中起重要作用。把ANK6作为“饵”蛋白,利用酵母双杂交的方法筛选拟南芥cDNA文库,筛选到一些与ANK6蛋白相互作用的候选蛋白,SIG5是其中之一。本研究用实验证实SIG5与ANK6确实存在互作,研究结果如下：分别构建好ANK6和SIG5的酵母双杂载体,共同转入AH109酵母菌株,利用酵母双杂交系统证实ANK6和SIG5的全长在酵母细胞中发生相互作用。构建六个SIG5分段缺失突变体,把它们分别与ANK6放入酵母双杂系统中验证,发现ANK6是与SIG5的N端发生了相互作用。为了进一步证明ANK6蛋白和SIG5蛋白的相互作用这一结果,构建ANK6-GST和SIG5-His6融合蛋白,并把它们在原核系统中表达,分离该两种可溶的重组蛋白,然后进行Pull-down实验,用Western-blot验证目的蛋白的存在。Pull-down实验的结果也证实了ANK6蛋白和SIG5蛋白确实发生了相互作用。SIG5和ANK6的突变体都筛选不到纯合体,且其杂合突变体果荚中存在空座位现象。构建SIG5-GUS融合基因,将融合基因通过花浸法转化得到GUS转基因植物。从GUS化学组织染色可以看出,SIG5的转基因植物有空间上的特异性,主要是在花粉,胚珠,叶中有特异的表达,这也与ANK6相似。综上所述,本研究主要对拟南芥ANK家族中的成员ANK6进行了蛋白相互作用的分析。通过酵母双杂交和pull-down实验发现并验证了ANK6蛋白和SIG5蛋白发生相互作用,SIG5基因的突变体和ANK6基因的突变体有着极为相似的表型,并且表达模式上也极为相似。这为更好的研究ANK6基因在拟南芥生长发育过程中的生理功能奠定了基础。