三种披碱草种子的生理生化特性及基因组对老化过程的响应

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本文以三种披碱草属种子为材料,采用高温高湿(45℃,100%)的人工老化方法对试验种子进行处理,探究三种披碱草属种子生理生化特性的改变和基因组DNA的损伤状况。通过以上的研究,旨在找到影响种子活力的生理指标,并通过分子标记技术探索老化种子基因组DNA的ISSR特异性条带。深入地了解披碱草属种子老化的主要原因,为有效地探索披碱草属种子活力测定得方法提供科学依据,同时也为青藏高原种质资源的贮藏和生产提供理论依据。本文的试验结论如下:1.随着老化时间的延长,三种披碱草属种子的发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数下降,且发芽势下降最快。这些活力指标下降趋势最大是老芒麦种子,其次是垂穗披碱草和黑紫披碱草种子,这说明老芒麦种子抗老化能力最弱,黑紫披碱草次之,垂穗披碱草最强。2.三种披碱草种子活力与电导率存在负相关,但是垂穗披碱草、黑紫披碱草随着老化时间的延长有不明显的上升趋势,而老芒麦种子的电导率没有太大变化。3.在老化处理初期,保护酶的活性(POD、SOD活性)都有明显下降的趋势,这会导致细胞内活性氧和自由基的增加,随着老化时间的延长,下降的趋势慢慢平缓,这可能是对老化的主动适应。老芒麦的下降趋势要大于垂穗披碱草和黑紫披碱草的,这说明垂穗披碱草和黑紫披碱草种子的抗老化性要大于老芒麦的。4.老化处理种子的丙二醛含量随老化程度的加深而增加,老化初期上升较快,后期上升较慢。MDA含量的增加加剧了有毒物质的积累,抑制了POD、SOD的活性,使种子老化加剧,所以脂质过氧化作用是使种子老化的重要原因。5.随着老化的进行,可溶性糖含量上升,可溶性蛋白含量下降,这可能是由于种子内部的代谢系统的损伤和一些酶活性的降解或下降造成的。6.相关性分析结果可知,三个品种的活力指标与电导率存在不显著负相关,与丙二醛含量和可溶性糖含量均呈极显著负相关关系;种子活力指标和SOD、POD活性和可溶性蛋白含量呈显著正相关关系。7.主成分分析可知,第一主成分对发芽率,发芽势,发芽指数,活力指数,SOD,POD活性,溶性糖含量和丙二醛含量有绝对值较大的载荷度且第二主成分对电导率有绝对值较大的载荷度。说明活力指标、SOD、POD活性、可溶性糖含量、丙二醛含量可以作为衡量三个披碱草属种子质量可靠指标,电导率不能衡量种子的质量。8.筛选出了三种披碱草属种子的ISSR引物,建立并优化了扩增的反应体系与反应程序。用所选的10条引物对种子基因组进行DNA扩增,由扩增结果可知,随着老化的加深,种子基因组DNA的损伤是随机发生的,且损伤的范围一般在200-500bp和1000bp-1500bp高分子量两个区域,表现为条带的减少,某些特异性条带的增加,损伤严重时条带消失。
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