论文部分内容阅读
目的:研究小分子药物ITE对LPS诱导大鼠急性肺损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:将48只SPF级雄性SD大鼠(220-250g)随机分为4组(n=12):生理盐水(Control组)、脂多糖组(LPS组)、地塞米松(DXMS组)、小分子药物ITE(ITE组)。应用暴露式气道内滴注LPS方法构建大鼠ALI模型,ALI组、DSMX组和ITE组气管导管内滴注LPS(5mg/Kg),Control组气管导管内滴注等量生理盐水。四组大鼠气道滴注2小时后,腹腔注射药物处理:DXMS组和ITE组分别用DXMS(2mg/kg)、ITE(2mg/kg)腹腔内注射;而Control组和LPS组则注射等量生理盐水,首次腹腔注射后的24小时、48小时干预组再次给药。待首次腹腔给药72小时后处死大鼠,取肺组织、肺泡灌洗液(BALF)做进一步检测。观察并记录大鼠活体状况和大鼠肺组织大体情况;采用HE染色法观察大鼠肺组织病理形态;采用Smith评分标准评估大鼠肺组织病理损伤情况;称量大鼠肺组织的重量,计算肺湿干重比(W/D);计数BALF中总细胞数后,采用瑞-姬氏染色,在高倍镜下对中性粒细胞数、白细胞数分类计数;ELISA法检测BALF中炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1的浓度;Western blot检测NF-κB、Ah R及其下游目的基因CYP1A1的蛋白表达。结果:(1)采用暴露式气道内滴注LPS成功构建大鼠ALI模型,ITE和DXMS显著缓解了LPS刺激所引起的肺组织病理学改变。与LPS组相比,ITE组和DXMS组肺损伤均明显减轻,炎性细胞浸润程度降低,肺组织结构趋于正常。(2)与Control相比较,LPS组肺损伤评分明显增高(p<0.001)。与LPS组相比,DXMS组、ITE组肺损伤评分明显降低(p<0.05)。此外,DXMS组、ITE组大鼠肺组织Smith评分无统计学意义(p>0.05)。(3)与Control组相比,LPS组W/D比值显著升高(p<0.001)。与LPS组相比,DXMS组、ITE组W/D比值明显降低(p<0.05)。此外,与DXMS组相比,ITE组大鼠肺组织W/D比值明显降低(p<0.05)。(4)与Control组相比,LPS组BALF中总细胞数、中性粒细胞数、白细胞数显著升高(p<0.05)。与LPS组相比,DXMS组、ITE组BALF总细胞数、中性粒细胞数、白细胞数明显降低(p<0.05)。此外,与DXMS组相比,ITE组BALF总细胞数、中性粒细胞数、白细胞数无统计学差异(p>0.05)。(5)与Control组相比,LPS组BALF中IL-6、TNF-α、MCP-1含量显著升高(p<0.001)。与LPS组相比,DXMS组、ITE组BALF中IL-6、TNF-α、MCP-1含量明显降低(p<0.05)。此外,与DXMS组相比,ITE组中IL-6含量显著减少(p<0.05),但TNF-α、MCP-1含量无统计学差异(p>0.05)。(6)与Control组相比,LPS组NF-κB蛋白表达水平均显著增加(p<0.05)。与LPS组相比,DXMS组、ITE组NF-κB蛋白表达均显著降低(p<0.01)。此外,与DXMS组相比,ITE组NF-κB蛋白明显降低(p<0.05)。(7)与Control组相比,LPS组Ah R、CYP1A1蛋白表达水平均明显下降(p<0.05)。与LPS组相比,DXMS组、ITE组Ah R、CYP1A1蛋白表达均显著上升(p<0.01)。此外,与Control组相比,DXMS组CYP1A1蛋白表达无统计学意义(p>0.05)。结论:(1)实验采用暴露式气管内滴注LPS方法可成功诱导ALI大鼠模型,在此基础上进一步研究药物对ALI的治疗作用和其作用机制。(2)ITE可通过上调肺组织中Ah R的表达,进而抑制NF-κB信号通路及下游炎症因子的表达,从而发挥控制ALI的炎症反应。(3)Ah R或可作为干预ALI的可能靶点,小分子药物有望成为ALI治疗的有效措施,为早期有效防治急性肺损伤奠定理论基础。