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猪伪狂犬病(Pseudorabies, PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)所引起的一种高度接触性、急性传染病。PRV属疱疹病毒科(Herpesviridae)，α疱疹病毒亚科，该病在全球范围内给养猪业造成了巨大的经济损失。近期研究表明，一些疱疹病毒编码的miRNA在病毒复制与调节中起着至关重要的作用。MicroRNAs(miRNAs)是一种含有约22个核苷酸的非编码单链RNA分子，广泛存在于人类及其它各种生物中。它通过与靶mRNA特异性的结合，引起靶mRNA降解或者抑制其翻译，从而调节基因的转录后表达水平。伪狂犬病毒编码miRNA的研究才刚刚起步，因此，对伪狂犬病毒miRNA的探讨具有重要意义和学术价值。本研究利用PK-15细胞培养猪伪狂犬病毒，接毒后在不同时间阶段收集病毒细胞培养物，分别提取不同时间段细胞培养物的总RNA；变性聚丙乙烯酰胺凝胶分离出18-26nt的小片段RNA，小RNA分子两端先后连接生物接头后进行反转录，PCR扩增后回收DNA片段；将所获得DNA片段与质粒载体连接，将连接产物转化工程菌，构建猪伪狂犬病病毒miRNA的cDNA文库。从阳性克隆菌落中随机挑取一些克隆，进行PCR扩增鉴定克隆的特性并测序，则得到20个大小正确的序列，结合生物信息学方法初步筛选出miRNA。实验结果表明，通过富集小分子RNA、反转录扩增小RNA分子，成功构建猪伪狂犬病病毒小分子RNA的cDNA文库。序列分析和伪狂犬病病毒生物信息学相结合，筛选出1个猪miRNA和1个伪狂犬病毒miRNA，其中也存在接头自连或编码RNA降解片段，证实体外培养的伪狂犬病毒在繁殖过程中有microRNA的生成和存在。伪狂犬病毒miRNA的cDNA文库的成功构建，为伪狂犬病毒miRNA的研究奠定了基础，但所建cDNA文库克隆数量级有限，因此，本实验涉及伪狂犬病毒microRNA的研究只是一个开端。