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阿尔茨海默病（Alzheimer’s diseases，AD）是老年人常见的神经系统变性疾病，是痴呆最常见的病因。流行病学调查显示，44%的AD患者伴发有睡眠和（或）昼夜节律紊乱。现在也有越来越多的实验证明，睡眠障碍可能是阿尔茨海默病的重要诱因之一，kang等研究发现，脑组织液中Aβ浓度波动具有昼夜节律性，对APPswe/PS1dE9转基因小鼠慢性睡眠剥夺后，其脑组织中Aβ的沉积显著增加。目前观点认为这可能与睡眠障碍时神经元活性、氧化应激及褪黑素水平的改变相关，然而具体机制尚不明确。LINGO-1(LRR and Ig domain-containing, Nogo Receptor interacting protein-1)是由15号染色体(15q24.3, GI:15029689)编码，特异性表达在中枢神经系统的跨膜糖蛋白，可负性调节神经元的存活、轴突再生及髓鞘化，因而与神经系统发育、神经系统损伤修复、帕金森病、特发性震颤及神经系统脱髓鞘病变密切相关。目前有观点研究认为，LINGO-1也参与调节了AD的病理过程，LINGO-1能够与APP相互结合，通过促进β-分泌酶的剪切作用调节APP的代谢，其机制仍未阐明，作者认为，LINGO-1可能促进了β分泌酶的活性或表达，也可能是抑制了α-分泌酶的作用。然而，LINGO-1的调控机制尚不明确，其表达增高见于PD患者、PD动物模型、中枢神经系统损伤模型及携带lingo1rs9652490等位基因的人群，神经元的损伤和死亡也会引起LINGO-1表达的增加，据此，Zhou等认为，LINGO-1的表达变化可能与氧化应激及基因突变相关。Trifunovski等则证实神经元活性增加可以促进LINGO-1表达。而睡眠/觉醒状态与神经元活性密切相关，有研究显示，睡眠剥夺可导致机体的默认模式网络功能持续激活。以上这些证据提示，睡眠/觉醒可能会通过影响神经元活性影响LINGO-1的表达。LINGO-1可能参与介导了睡眠剥夺对APP代谢的调节。本课题研究包括两个部分。第一部分我们通过片段睡眠剥夺模型和Western blot技术研究了睡眠/觉醒对LINGO-1表达的影响，第二部分并利用RNA干扰及免疫共沉淀等方法研究LINGO-1是否参与介导睡眠剥对APP代谢的调节，并对其机制进行探索。本研究的主要结果如下：1片段睡眠后ICR小鼠不同脑区LINGO-1表达上调，且与片段睡眠剥夺时间的长度相关。ICR小鼠片段睡眠剥夺三天后，分别取额叶、颞叶和下丘脑。采用Western blot方法检测，与对照组相比，上述脑区LINGO-1表达均有所上调。对ICR小鼠分别给予1、3、5、7天的睡眠剥夺，然后检测不同时长睡眠剥夺后LINGO-1表达的变化趋势，发现LINGO-1的表达与片段睡眠剥夺的时长呈正相关。2LINGO-1的表达具有昼夜节律性。用Western blot分别检测0:00、4:00、8：00、12:00、16:00和20:00颞叶LINGO-1的表达，发现4:00LINGO-1的表达明显高于其他时间点。3片段睡眠剥夺后小鼠颞叶BACE1表达的增加。ICR小鼠片段睡眠剥夺三天后，取颞叶脑组织用Western blot检测BACE1的表达,发现BACE1的表达明显增高。4LINGO-1参与调控BACE1的表达。用lingo-1RNA干扰慢病毒转染神经元，收集细胞裂解液，用Western blot检测BACE1的表达，发现内源性干扰LINGO-1的表达后，BACE1的表达下调。5LINGO-1与BACE1在体内不直接结合。取ICR小鼠脑组织裂液，用免疫共沉淀技术分别用anti-BACE1antibody和anti-LINGO-1antibody从正反向验证，发现二者在体内不存在直接的结合。6片段睡眠剥夺可导致GSK3β磷酸化水平下调。ICR小鼠片段睡眠剥夺三天后，取颞叶脑组织用Western blot检测p-GSK3β和total-GSK3β的表达，发现与对照组相比，GSK3β磷酸化水平下调。7LINGO-1参与调控GSK3β的磷酸化水平。用lingo-1RNA干扰慢病毒转染神经元，收集细胞裂解液，用Western blot检测的表达p-GSK3β和total-GSK3β的表达，发现内源性干扰LINGO-1的表达后，GSK3β磷酸化水平升高。8LINGO-1与GSK-3β在体内相互结合。取ICR小鼠脑组织裂解液，用免疫共沉淀技术证实，LINGO-1与GSK3β在体内相互结合。综上所述，本实验研究发现，LINGO-1的表达受睡眠/觉醒的调控，LINGO-1可通过调节GSK3β的磷酸化水平来间接调节BACE1的表达，从而参与介导睡眠剥夺对APP代谢的调节。