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目的:卵巢癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤。目前,铂类是卵巢癌临床化疗的一线药物,但是铂类药物耐药显著降低了卵巢癌患者的生存率,因此,深入了解卵巢癌铂类耐药分子机制有助于提高卵巢癌患者的生存率,并且为临床个体化精准治疗提供可靠依据。泛素样蛋白干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)编码17kDa的前体蛋白,经过水解形成15kDa的成熟蛋白ISG15。ISG15可以以游离形式存在,也能够与底物共价结合形成ISG化蛋白,在各种癌症中发挥着促癌或抑癌的作用。Krüppel样因子(Krüppel-like factors,KLFs)是C末端具有保守的锌指结构域的一类转录因子。本研究发现,在顺铂耐药的卵巢癌细胞中ISG15表达下调;过表达野生型和G156/157A突变体型ISG15均抑制了顺铂耐药卵巢癌细胞的肿瘤干细胞样表型;敲低ISG15促进了顺铂敏感卵巢癌细胞的肿瘤干细胞样表型;并且,转录激活因子KLF1和转录抑制因子KLF12竞争性调控ISG15表达。因此,本研究提示KLF1、KLF12通过竞争性调节ISG15的表达参与卵巢癌顺铂耐药,为卵巢癌的靶向治疗提供新的候选靶点。研究方法:1、培养顺铂敏感和顺铂耐药的人卵巢癌细胞株,通过慢病毒感染的方法构建稳定过表达和敲低的ISG15的卵巢癌细胞系。2、CCK8实验来检测各个目的细胞系的细胞增殖情况。3、利用Western blot分析各个目的基因的蛋白表达的水平。4、使用Dot Blot方法来检测顺铂耐药及顺铂敏感的卵巢癌细胞中ISG15向胞外分泌的水平。5、通过克隆形成实验检测过表达或敲低ISG15时卵巢癌细胞的克隆形成能力。6、使用Transwell实验检测ISG15过表达或敲低ISG15时卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力。7、利用qRT-PCR方法来检测各个细胞系中ISG15的mRNA的表达水平。8、应用试剂盒来标记并捕获卵巢癌细胞中新生的ISG15的mRNA水平。9、应用Actinomycin D按时间梯度处理卵巢癌细胞检测ISG15的mRNA稳定性。10、应用球囊形成实验来检测过表达ISG15或敲低ISG15时卵巢癌细胞的球囊形成的能力。11、应用荧光素酶报告基因试验来检测转录因子KLF1、KLF12与ISG15的结合的活性部位。12、用染色质免疫共沉淀来检测ISG15对于转录因子KLF1、KLF5和KLF12的募集。13、通过裸鼠成瘤实验来检测过表达ISG15对卵巢肿瘤形成能力的影响。14、采用方差分析和Dunnett’s t检验分析临床患者中低表达的ISG15的卵巢癌患者的统计学意义。结果:1、ISG15在顺铂耐药的卵巢癌细胞表达下调,过表达ISG15抑制了卵巢癌细胞肿瘤干细胞样表型。2、敲低ISG15促进顺铂敏感卵巢癌细胞的肿瘤干细胞样表型。3、过表达ISG15抑制了裸鼠肿瘤形成,临床数据分析低ISG15表达水平与卵巢癌患者预后不良相关。4、ISG15 mRNA表达受到转录和转录后水平调控。5、KLF1和KLF12竞争性调节ISG15启动子的CACCC元件,从而实现在转录水平调控ISG15表达。结论:顺铂耐药卵巢癌中游离型ISG15表达下调,促进卵巢癌肿瘤干细胞样表型;转录激活因子KLF1与转录抑制因子KLF12竞争性调节ISG15的表达,从而维持卵巢癌肿瘤干细胞样表型。