【摘 要】
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目的:卵巢癌是妇科恶性肿瘤死亡的最常见原因之一,原发性或获得性顺铂耐药在卵巢癌治疗过程中经常发生。肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）倾向于在化疗后形成一定的疾病残留和复发风险。最近越来越多的研究发现,肿瘤细胞重新编程其代谢的能力和CSC的维持都与化疗耐药性有关。因此,深入研究卵巢癌的代谢重编程与CSC的维持分子机制,将有助于为临床治疗耐药提供新的解决方案,进一步提高卵巢癌患
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目的:卵巢癌是妇科恶性肿瘤死亡的最常见原因之一,原发性或获得性顺铂耐药在卵巢癌治疗过程中经常发生。肿瘤干细胞（cancer stem cells,CSCs）倾向于在化疗后形成一定的疾病残留和复发风险。最近越来越多的研究发现,肿瘤细胞重新编程其代谢的能力和CSC的维持都与化疗耐药性有关。因此,深入研究卵巢癌的代谢重编程与CSC的维持分子机制,将有助于为临床治疗耐药提供新的解决方案,进一步提高卵巢癌患者的生存率。BAG5是一种多功能蛋白,参与多种细胞过程,如应激反应、自噬和凋亡等。近年来,有多项研究表明BAG5在不同肿瘤的进展中发挥着重要作用。在本研究中,我们发现BAG5在顺铂耐药卵巢癌细胞和临床组织中表达降低,并且,数据表明BAG5敲低通过调控Rictor和随后的mTORC2信号通路,可能参与了卵巢癌细胞的代谢重编程和CSC样特征维持。本研究旨在探究BAG5在卵巢癌中的作用,论证BAG5/Rictor-mTORC2信号通路在顺铂耐药卵巢癌细胞中代谢重编程和维持CSC样特征的意义。这可能有助于建立顺铂耐药卵巢癌治疗的新策略。研究方法:1、通过Western blot实验检测顺铂敏感和耐药卵巢癌组织或细胞中BAG5的蛋白表达水平。2、利用定制的慢病毒感染细胞,分别构建稳定敲低BAG5的顺铂敏感卵巢癌细胞和过表达BAG5的顺铂耐药卵巢癌细胞。3、CCK-8实验检测在顺铂处理后各组细胞的存活能力。4、通过克隆形成实验检测敲低BAG5的顺铂敏感卵巢癌细胞系和过表达BAG5的顺铂耐药巢癌细胞系的克隆形成能力。5、使用Matrigel侵袭实验检测BAG5敲低或过表达的卵巢癌细胞的侵袭能力。6、应用球囊形成实验检测BAG5敲低或过表达的卵巢癌细胞的球囊形成的能力。7、利用裸鼠成瘤实验检测BAG5对卵巢癌细胞致瘤能力的影响。8、应用Seahorse XF细胞线粒体压力测试试剂盒和细胞糖酵解压力测试试剂盒检测各组卵巢癌细胞的氧消耗速率和细胞外酸化率。9、利用试剂盒检测BAG5敲低或过表达的卵巢癌细胞的乳酸释放和葡萄糖消耗量。10、利用Western blot分析各组卵巢癌细胞mTOR通路相关蛋白的表达水平。11、Real-time PCR检测基因转录水平。12、采用方差分析、Pearson系数检验和log-rank检验分析BAG5在卵巢癌组织中相关差异的统计学意义。结果:1、比较顺铂敏感卵巢癌组织样本和卵巢癌细胞系,BAG5的表达在顺铂耐药的组织和细胞中均下调。2、在顺铂耐药卵巢癌细胞中,过表达BAG5能减弱其细胞活力、克隆形成能力、侵袭能力、球囊形成能力以及裸鼠成瘤能力。3、过表达BAG5下调了卵巢癌细胞的氧消耗速率和细胞外酸化率以及乳酸的生成和葡萄糖摄取。4、在顺铂敏感的卵巢癌细胞系中,敲低BAG5能增加细胞活力、克隆形成能力、侵袭能力以及球囊形成能力。5、敲低BAG5上调卵巢癌细胞的氧消耗速率和细胞外酸化率以及乳酸的释放和葡萄糖消耗。6、与卵巢粘液腺癌相比,BAG5常在浆液腺癌中高表达,并且BAG5高表达与浆液腺癌患者良好的生存显著相关。7、顺铂耐药卵巢癌细胞中Raptor、Rictor和p-Ser2448-mTOR与p-Ser2481-mTOR以及p-Ser473-AKT均升高。过表达BAG5能降低Rictor的表达以及p-Ser2481-mTOR、p-Ser473-AKT的磷酸化,但没有表现出对Raptor和p-Ser2448-mTOR的影响。8、过表达BAG5不改变Rictor m RNA的表达,但在翻译水平抑制Rictor的表达。9、过表达Rictor可显著减弱过表达BAG5对p-Ser2481-mTOR和p-Ser473-AKT的抑制作用,同时,过表达Rictor也显著削弱了BAG5对CD44和CD133表达的抑制作用,逆转了BAG5对卵巢癌耐药细胞氧消耗速率、细胞外酸化率、葡萄糖消耗和乳酸释放的抑制作用。10、BAG5与Rictor在多数卵巢浆液腺癌组织中呈负相关。结论:顺铂耐药卵巢癌中BAG5表达下调,减弱了其在翻译水平上对Rictor表达的抑制。BAG5通过Rictor-mTORC2信号通路抑制卵巢癌细胞的糖代谢和干细胞样特征。
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