含GFP基因的莱茵衣藻高效表达载体的构建及其在衣藻叶绿体中的表达

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衣藻因其所具有的独特细胞结构,清晰的遗传学背景,是研究各种生命现象的模式生物。衣藻叶绿体是良好的生物反应器,是表达外源基因的理想场所。但是目前存在外源基因表达量不高等问题限制了衣藻的商业化应用。启动子及增强子是表达外源基因的关键调控元件,其活性高低直接影响外源基因的表达量。本研究中构建了以绿色荧光蛋白GFP基因作为报告基因,分别含有启动子atpA或psbA及增强调控元件的衣藻叶绿体表达载体,利用基因枪法将上述构建的一个载体转化衣藻后,经过壮观霉素筛选,获得了衣藻转化子。本论文的主要内容及结果:1、以gfp基因作为报告基因,构建了含有衣藻叶绿体atpA及其增强子调控元件的衣藻叶绿体表达载体。2、PCR法克隆了衣藻叶绿体psbA启动子,将其与(dA/dAG/E)等调控元件组合,构建了系列衣藻叶绿体表达载体。3、构建含有gfp基因和aadA双表达盒的莱茵衣藻叶绿体表达载体pgfpa2,利用基因枪法将该表达载体导入到了衣藻中,经过壮观霉素抗性筛选获得了转基因藻株。上述工作为外源基因在衣藻中高效表达奠定了坚实的基础。
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