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莲子为睡莲科水生草本植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥成熟种子,是我国常用的大宗中药材,由于其极高的药用和滋补价值,在食用和医疗保健中发挥了十分重要的作用,也是我国中药材出口创汇的重要品种之一。该品多产于我国湖北、湖南、福建等南方温湿地区,富含油脂和淀粉,储藏不当,则易发生霉变。前期研究,发现莲子在采收、储藏和流通过程中易受真菌毒素污染,严重影响了莲子药材的质量、安全性和出口创汇。针对莲子真菌毒素污染研究,尤其以黄曲霉毒素和赭曲霉毒素研究最多,其中黄曲霉毒素,阳性率达70%,其中30%的样品中AFB1含量超出了限量标准(5μg/kg),25%的样品AFs总量超出了限量标准(10μg/kg),国外亦有莲子中黄曲霉毒素污染的报道,为莲子的“药用”和“食用”带来严重的安全隐患。鉴于莲子药材中黄曲霉素和赭曲霉毒素的污染情况,很有必要建立灵敏准确的快速筛查分析方法,随行监控采收、储藏和流通过程中药材真菌毒素的污染状况,保障药材质量。基于此本论文主要研究内容和结论如下: (1) CdSe/CdS核壳量子点的合成。研究采用液体石蜡作为反应溶剂,Cd(DDTC)2为前驱体,以连续壳层前驱体注入方式合成CdSe/CdS核壳型量子点,并采用透射电镜对其形貌特征进行表征。实验优化了油胺和壳层前驱体在整个反应体系中的用量,结果表明,在50%(体积比)油胺和10次前驱体加入量的条件下,成功制备了点状CdSe/CdS核壳量子点。 (2)基于适配子标记量子点检测OTA。本章首先将油溶性CdSe/CdS量子点转化为可用于生物标记的水溶性量子点。其次,通过硫代碱基修饰的ssDNA作为量子点配体,其功能区含有我们需要标记的适配子,“锚”区作为连接量子点的标记区。通过改变“锚”区硫代碱基的数目,达到控制标记在量子点表面ssDNA数目。最后,我们用优化的ssDNA-CdSe/CdS作为生物传感器,建立OTA的检测方法,结果显示,OTA在1-30 ng/mL范围内线性关系良好(R2>0.9513),其线性拟合方程为y=4.75x+323.18,满足限量标准5 ng/mL的检测要求。 (3)建立间接竞争酶联免疫吸附法快速筛检莲子中黄曲霉毒素B1的污染水平。本法采用间接竞争酶联免疫法测定了经甲醇-水(80∶20)溶液提取后莲子药材中的黄曲霉毒素B1。通过对包被抗原和一抗工作浓度进行优化,建立了最佳ic-ELISA法,结果显示,AFB1在0.171~7.25 ng/mL之间线性关系良好,R2>0.978,IC50为1.29 ng/mL,回收率在74.73%~126.9%之间,该法检测限为0.128 ng/mL。应用该法检测20批莲子药材,结果显示:1~15号样品(30℃、30%湿度条件下贮藏一年)中AFB1污染水平为1.19~115.3μg/kg,40%样品中AFB1含量超过限量标准,16~20号样品(新购买)中AFB1污染率为40%。对上述结果采用液质联用确证,样品中AFB1与标品具有相同的保留时间、离子碎片、离子碎片丰度比,排除了假阳性的检测结果。表明本研究建立的ic-ELISA分析方法操作简便、灵敏、结果准确,可用于莲子中AFB1的高通量现场快速检测。