【摘 要】
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番茄是一种重要的蔬菜作物,真菌病害是制约番茄生产的主要因素.利用基因工程培育抗真菌番茄新品种是最经济有效的防治中方法.首先用PCR法从含RC24基因的质粒pARN6扩增RC24基
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番茄是一种重要的蔬菜作物,真菌病害是制约番茄生产的主要因素.利用基因工程培育抗真菌番茄新品种是最经济有效的防治中方法.首先用PCR法从含RC24基因的质粒pARN6扩增RC24基因的结构基因片段,扩增产物插入到PinPiont Xal-Vector载体上,再用限制性内切酶XbaI、KpnI从PinPiont Xal-Vector载体上,将RC24基因切下,重组到植物双元表达载体pROK上.同样用PCR法从含β-1,3-Glu基因的质粒pAAG89扩增β-1,3-Glu基因的结构基因片段,获得的扩增产物插入到PinPiont Xal-Vector载体上,通过限制性内切酶XbaI、SacI消化后,重组到植物双元表达载体pBI121上.分别获得能在番茄里表达RC24基因的pROKRC和β-1,3-Glu基因的pBIG.再用限制性内切酶HindIII从含有抗除草剂基因的质粒pBARGUS上,切下2.1kb的抗除草剂BAR基因片段,分别重组插入到pROKRC和pBIG的HindIII位点上,这样就得到了两个具有抗除草剂标记的抗真菌基因植物双元表达载体pROKRCB和pBIGB.通过冻融法获得含双元表达载体pROKRCB和pBIGB的农杆菌LBA4404.采用叶盘转化法,分别感染无菌番茄子,在含Kan的培养基上诱导愈伤组织成苗,最终得到抗Kan的再生植株.
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