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研究目的：客观评价葛根素及银杏叶提取物对眼血流的改善作用；从分子生物学的角度研究葛根素及银杏叶提取物对视网膜血管内皮细胞及脉络膜血管内皮细胞分泌eNOS及ET-1的影响,初步探讨葛根素及银杏叶提取物改善视网膜、脉络膜血流的分子生物学机制,为临床用药提供客观依据和指导,同时也为今后研究活血中药提供新的思路和方法。研究方法：1.选取前部缺血性视神经病变患者41名,随机分为2组,进行葛根素或银杏叶提取物注射液静脉点滴联合口服补阳还五汤治疗,运用彩色超声多普勒技术比较用这两种药物治疗前后患者患眼动脉及视网膜中央动脉的收缩期峰值血流速度、舒张末期血流速度及阻力指数,采用SPSS17.0统计软件对各组参数进行比较和分析。2.选取前部缺血性视神经病变患者41名,随机分为2组,进行葛根素或银杏叶提取物注射液静脉点滴治疗,运用球结膜微循环监测技术比较用这两种药物治疗前后患者的球结膜的血流有无变化,采用SPSS17.0统计软件对各组加权积分进行比较和分析。3.分别培养视网膜血管内皮细胞及脉络膜血管内皮细胞,用MTT法检测葛根素及银杏叶提取物对这两种细胞增殖活性的影响；采用蛋白免疫印迹法检测葛根素及银杏叶提取物对视网膜血管内皮细胞及脉络膜血管内皮细胞分泌eNOS及ET-1的影响。研究结果：1.葛根素及银杏叶提取物联合口服补阳还五汤治疗后患者眼动脉PSV治疗后较治疗前明显增加,且治疗前后差异有统计学意义(P<0.05),EDV治疗后较治疗前增加,但治疗前后差异无统计学意义(P>0.05),RI治疗后较治疗前降低,但治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)；患者视网膜中央动脉PSV治疗后较治疗前明显增加,且治疗前后差异有统计学意义(P<0.05),EDV治疗后较治疗前增加,但治疗前后差异无统计学意义(P>0.05),RI治疗后较治疗前降低,但治疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。2.葛根素组输液后球结膜微循环加权积分小于输液前积分,差异有统计学意义(P<0.05)；银杏叶提取物组输液后球结膜微循环加权积分小于输液前积分,差异有统计学意义(P<0.05)。3.培养的内皮细胞的鉴定：Ⅷ因子定位于胞浆中,免疫荧光化学显示所培养细胞胞浆中有黄绿色的荧光着色,胞核呈黑绿色,整个细胞轮廓清楚,表明细胞为内皮源性细胞。4.内皮细胞培养的关键因索：20g·L-1明胶可获得较高的细胞贴壁率；此外,内皮细胞完全培养基的使用对内皮细胞的维持培养非常关键。本研究采用DMEM及Ham’F12作为基础培养基,添加胎牛血清、ECGF以及肝素,结果表明已可满足内皮细胞的生长；胎牛血清的浓度及质量对内皮细胞的生长也有至关重要的作用；内皮细胞还是密度依赖性生长的细胞,接种的细胞太稀,将不利于细胞的生长,3×101个/ml的密度较利于内皮细胞的生长。5.MTT比色法检测葛根素对视网膜血管内皮细胞的作用,结果显示葛根素对视网膜血管内皮细胞生长有明显的促进增殖效应。24及48h五个浓度葛根素组OD值均高于空白对照组(P<0.05),视网膜血管内皮细胞增殖明显,并且随药物浓度增加OD值也增加,说明葛根素有促进视网膜血管内皮细胞增殖的作用；MTT比色法检测银杏叶提取物对RVECs的作用,结果显示24h五个浓度银杏叶提取物组OD值均高于空白对照组(P<0.05),血管内皮细胞增殖明显。48h0.001、0.01、0.1μg/ml三个浓度OD值均高于空白对照组(P<0.05)；0.0001μ g/ml组OD值高于空白对照组,但无统计学差异(P>0.05)；1μg/ml组OD值低于空白对照组(P<0.05),说明银杏叶提取物有促进视网膜血管内皮细胞增殖的作用。6.MTT比色法检测葛根素对脉络膜血管内皮细胞的作用,结果显示24及48h四个浓度葛根素组OD值均高于空白对照组(P<0.05),脉络膜血管内皮细胞增殖明显,并且随药物浓度增加OD值也增加,说明葛根素有促进脉络膜血管内皮细胞增殖的作用；MTT比色法检测银杏叶提取物对脉络膜血管内皮细胞的作用,结果显示24及48h四个浓度银杏叶提取物组OD值均高于空白对照组(P<0.05),脉络膜血管内皮细胞增值明显,并且随药物浓度增加OD值也增加,说明银杏叶提取物有促进脉络膜血管内皮细胞增殖的作用。7.与阴性对照组相比,银杏叶低浓度及高浓度组、葛根素低浓度及高浓度组eNOS的相对表达量均升高(P<0.01),且随着药物浓度的增加eNOS的表达也增加；银杏叶低浓度及高浓度组、葛根素低浓度及高浓度组ET-1的相对表达量均下降(P<0.01),银杏叶组低浓度及高浓度组间ET-1的相对表达量无统计学差异(P>0.05),葛根素组ET-1的表达随着药物浓度的增加而下降,两组间差异有统计学意义(P<0.01)研究结论：1.本研究发现葛根素及银杏叶提取物联合口服补阳还五汤治疗后能提高AION患者眼部眼动脉和视网膜中央动脉的灌注压,改善眼动脉和视网膜中央动脉的血流速度,从而改善视神经的缺血状态。为了观察单独应用葛根素及银杏叶提取物后对眼血流的作用,本研究还进行了单次输液前及输液后30分钟对球结膜血流的检测,发现葛根素及银杏叶提取物还能改善AION患者球结膜的血流,据此推测葛根素及银杏叶提取物可以改善眼动脉及睫状前动脉的血流。所以综合彩色多普勒血流显像及球结膜血流的观测结果,可以推测葛根素及银杏叶提取物能改善AION患者眼部的血流量,不仅能改善视网膜的血供,也能改善脉络膜的血供。2.无论是体外培养的视网膜血管内皮细胞还是脉络膜血管内皮细胞,加药组的eNOS表达量均增加,ET-1的表达均下调,据此可以推测葛根素及银杏叶提取物可能通过调节血管一氧化氮内皮素(NO/ET)的比值,维持内皮依赖性舒张因子(EDRF)和内皮细胞依赖性收缩因子(EDCF)功能的动态平衡,从而发挥松弛视网膜及脉络膜的血管平滑肌的作用,改善视网膜及脉络膜的血流。