第一部分：温度敏感性培养皿培养结膜上皮膜片的实验研究　　目的：探讨以温度敏感性培养皿为载体培养结膜上皮细胞构建含杯状细胞的复层结膜上皮膜片的可行性。　　方法：1．分离和培养兔结膜上皮细胞，免疫细胞化学染色、PAS染色、鬼笔环肽染色鉴定细胞。　　2.通过降低培养温度获得结膜上皮细胞膜片，并检测结膜上皮细胞膜片的细胞活性和基因表达。　　3.组织学和免疫组织化学染色检测结膜上皮细胞膜片的结构和表型。　　结果：1.培养的结膜细胞表达 CK4，CK19，MUC5AC；PAS染色显示少部分细胞中糖元表达阳性；鬼笔环肽染色显示典型的结膜上皮细胞和杯状细胞的结构。　　2.结膜上皮细胞在温度敏感性培养皿上增殖良好，其中杯状细胞占细胞比例大约为25.3％±1.34%。　　3.温度敏感性培养皿培养的结膜上皮膜片由4-5层分化良好的细胞层组成，结构和兔结膜上皮相似。　　结论：以温度敏感性培养皿为载体可以用来培养含有杯状细胞和活性细胞的复层结膜上皮膜片。　　第二部分：SF/PLCL电纺膜为载体构建结膜上皮层的实验研究　　目的：探究以SF/PLCL电纺膜为载体体外培养结膜上皮细胞构建结膜上皮层的可行性。　　方法：1.分离和培养兔结膜上皮细胞，免疫细胞化学染色、PAS染色、鬼笔环肽染色鉴定细胞。　　2.应用静电纺丝技术制成质量比为25:75（SF：PLCL）的纳米电纺丝膜。检测其表面形态及纤维直径，亲水角，机械性能。　　3．将细胞种到SF/PLCL电纺膜上，检测 SF/PLCL电纺膜的细胞相容性。体外培养1周后，将复合物植入裸鼠背部培养2周，初步观察复合体的组织学情况。　　结果：1.培养的结膜细胞表达CK4，CK19，MUC5AC；PAS染色显示少部分细胞中糖元表达阳性；鬼笔环肽染色显示典型的结膜上皮细胞和杯状细胞的结构。　　2．SF/PLCL电纺膜表面光滑，纤维直径均匀，多孔状结构，具有良好的机械性能。结膜上皮细胞在电纺丝膜表面粘附良好，电纺丝膜对细胞没有明显的细胞毒性，并且不引起明显的炎症反应。　　3.结膜上皮细胞在SF/PLCL电纺膜上形成复层上皮，在裸鼠体内形成复合体，组织学检测可见5-8层的上皮细胞层，与正常结膜结构相似。　　结论：以SF/PLCL电纺膜为载体可以构建复层结膜上皮样组织，有希望作为一种组织工程结膜上皮进行眼表重建。