Aft型番茄遗传转化及花青素合成相关转录因子表达分析

来源 :东北林业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:baiseshiren
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
Aft型番茄是由番茄野生种L.chilense与番茄栽培种Solanum lycopersicum杂交获得的,其果实在光下可以诱导合成花青素。花青素合成途径由MYB转录因子、bHLH转录因子、WD40蛋白形成的MBW复合物调控,但是番茄中不同组织部位花青素合成调控网络仍不十分清晰。为探究Aft型番茄花青素合成的关键调控因子之间的表达关系,及它们参与不同组织花青素合成的调控网络,本论文以Aft型番茄为试材,建立遗传转化体系。通过实时荧光定量PCR检测花青素合成相关MYB类(SlANT1、SlANT1-like、SlAN2、SlAN2-like)、bHLH类(SlJAF13、SlAN1)转录因子在根、茎、叶、子叶、下胚轴、花瓣、萼片、果皮等组织部位表达量。运用农杆菌转化法将SlAN2p::GUS、SlAN2-likep::GUS、SlJAF13p::GUS、SlAN1p::GUS等载体转入Aft型番茄中,通过组织化学染色判断其在不同组织的表达情况,进一步分析转录因子不同组织表达模式。此外,本研究成功建立了Aft型番茄CRISPR/Cas9基因编辑体系,并对bHLH类转录因子SlAN1进行基因敲除,进而深入研究S1AN1在Aft番茄不同组织花青素合成网络中的调控作用。本文获得的结果如下:1、Aft型番茄遗传转化体系的建立。Aft型番茄遗传最佳诱导生芽培养基为:MS+Zt 0.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L,最佳遗传转化体系:对番茄子叶外植体经预培养,用含有pCAMBIA2301载体的EHA105农杆菌侵染子叶10min,黑暗共培养2d,用含有Tim300 mg/L和Kana 80 mg/L的培养基进行20 d的筛选,经过3次继代,60 d的筛选,长出幼苗将其放入生根培养基中,待生根后检测,平均转化效率为0.46%。2、Aft型番茄花青素合成相关转录因子组织特异性表达分析。MYB转录因子SlANT1在各个组织中表达量均较低,SlANT1-like在茎中特异表达,SlAN2在营养器官中表达量较高,而SlAN2-like特异在果皮中表达。bHLH转录因子中SlAN1在营养器官中表达量较高,与SlAN2表达模式类似,SlJAF13在各个组织中均有表达。3、成功建立Aft型番茄CRISPR/Cas9基因编辑体系。以SlAN1为靶基因,设计sgRNA,构建CRISPR/Cas9-AN1表达载体。经过遗传转化,获得T0代转基因植株10株,纯合突变体植株5株,包含碱基插入及碱基缺失两种突变类型,杂合突变体植株5株,纯合突变体表型为整株植物均无花青素,杂合突变体表型与Aft型番茄一致。
其他文献
随着信息科学技术的发展,医学数据的规模以“爆炸”式的速度发展,海量的数据为健康大数据的产生提供了基础。基于机器学习等方法进行医学数据分析从而实现疾病预测、诊断成为
目的:探讨复拇畸形术前的拇指正位、斜位X线片的表现差异及其对手术的指导意义。方法:选取Wassel分型各型复拇畸形391个,对比各型复拇畸形术前拇指在正位、斜位X线片上的骨关节表现差异,手术中探查验证实际骨关节表现与正位、斜位X线片的符合度,并根据此骨关节表现的特点进行相应处理。结果:37个WasselⅠ、Ⅱ型病例,56个WasselⅢ、Ⅳ型病例,22个WasselⅤ、Ⅵ型病例及15个Wassel
通过野外调查,对长白山自然保护区次生杨桦林多种林分粗木质残体(CWD)的覆盖率、贮量、直径分布规律、树高/长度结构、腐烂等级分布特征以及空间分布格局等方面进行研究,旨在
为提高烟叶钾肥利用率及改善烟叶品质,以烤烟品种K326为材料,利用接触角法测定了烟叶的临界表面张力;选取了蔗糖脂肪酸酯、茶皂素、洗衣粉3种表面活性剂,测定其临界胶束浓度
实验背景:食管癌(Esophageal cancer,EC)是指发生在食管上皮的恶性消化道肿瘤,其中最常见的病理类型是食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和食管腺癌(Esopha
大脑中的神经元电活动控制着从肌肉运动的常规调节到记忆、推理等复杂的智能运算,这些电活动是神经系统信息传递的主要活动表征。因此,如何精确记录神经系统的电活动是神经科
目的:颅内镜像动脉瘤是临床中较为少见的类型,相关的研究不多,其临床特征、治疗方案及影响预后的因素等仍存在较大争议。本研究旨在对我中心的临床资料进行总结分析,以明晰颅内镜像动脉瘤的临床特征、治疗方法及预后影响因素。方法:回顾性分析我院神经外科自2014年5月份至2019年1月收治的61例颅内镜像动脉瘤患者,其中男性12例,女性49例,年龄为4577岁,平均年龄60.62±7.80岁。分析颅内动脉瘤的
《千金方》包括《备急千金要方》与《千金翼方》,是唐朝孙思邈搜罗古今名方、各地验方,倾尽毕生精力所完成的一部巨著,该书收载方剂众多,疗效显著,但因该书内容繁杂、方剂众
本文以内蒙古自治区中南部半干旱黄土丘陵区和林格尔县境内人工种植的4年生水土保持先锋植物种-柠条(Caragana korshinskii)的根系为研究对象,采用土力学与材料力学的理论和
树木的生长受很多因素的制约,主要包括自身生理因素以及外界环境因素,其中树木的年龄和竞争对树木生长有着至关重要的影响。本文以小兴安岭地区单木红松为研究对象,利用树木