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目的支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是严重威胁早产儿尤其极早早产儿的一种常见肺部疾病。前期研究发现,在高氧诱导的BPD中,肺泡Ⅱ型上皮细胞(type II alveolar epithelial cells,AECⅡs)凋亡增加,且通过内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导的CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)凋亡途径活化。但CHOP表达改变对高氧暴露后AECⅡs凋亡是否产生影响,目前尚不清楚。本研究主要通过检测被CHOP-siRNA转染的AECⅡs细胞株在高氧暴露后CHOP、Bcl-2和Bax的表达水平以及AECⅡs凋亡情况,探讨阻断内源性CHOP表达对高氧暴露AECⅡs凋亡的影响。方法体外设计合成靶向CHOP基因的siRNA碱基序列,采用Lipofectamine2000脂质体介导法对AECⅡs细胞进行pcDNA3.1(+)-CHOP-siRNA及pcDNA3.1(+)-空质粒瞬时转染,RT-PCR和Western blot检测siRNA干扰后CHOP基因沉默效果。转染后24 h给予高氧暴露,将细胞分为空气组、空气+pcDNA3.1(+)-空质粒组、空气+pcDNA3.1(+)-CHOP-siRNA组、高氧组、高氧+pcDNA3.1(+)-空质粒组、高氧+pcDNA3.1(+)-CHOP-siRNA组。倒置相差显微镜观察细胞形态,于空气或高氧暴露48 h收集各组细胞,Annexin V/PI双染法及流式仪检测早期细胞凋亡,RT-PCR及Western blot检测CHOP、Bcl-2及Bax表达水平。结果(1)空气组AECⅡs伸出较多伪足,紧贴于瓶底,呈岛状生长方式,空气+pcDNA3.1(+)-空质粒组及空气+pcDNA3.1(+)-CHOP-siRNA组细胞形态与空气组相比无明显差异;高氧组AECⅡs伸展肥大明显,细胞贴壁不紧,伪足减少,核仁减少或消失,培养液中悬浮细胞数增加,少数细胞出现空泡改变,高氧+pcDNA3.1(+)-空质粒组与高氧组相比无明显差异;高氧+pcDNA3.1(+)-CHOP-siRNA组细胞形态较空气组稍有伸展肥大,但较高氧组细胞伸展程度变小,悬浮细胞数减少,且细胞无空泡改变。(2)与空气组相比,高氧组AECⅡs凋亡明显增加,CHOP基因mRNA及蛋白表达增加,Bcl-2基因mRNA及蛋白减少,Bax基因mRNA及蛋白表达增加。(3)AECⅡs转染CHOP-siRNA后,与高氧组相比,高氧+pcDNA3.1(+)-CHOP-siRNA组AECⅡs凋亡减少,CHOP基因mRNA及蛋白表达减少,Bcl-2基因mRNA及蛋白表达增加,Bax基因mRNA及蛋白表达减少。结论(1)高氧可导致AECⅡs凋亡增加,CHOP表达增加,抗凋亡基因Bcl-2减少,促凋亡基因Bax增加,提示高表达的CHOP可通过下调抗凋亡基因Bcl-2表达及促进促凋亡基因Bax的表达,最终导致细胞凋亡增加。(2)AECⅡs转染CHOP-siRNA阻断CHOP表达后,可减轻高氧诱导的AECⅡs凋亡。