蚓激酶的提取纯化、酶学性质及抗血栓效果研究

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本试验以赤子爱胜蚓为原料,探讨了蚓激酶的纯化工艺参数,并对蚓激酶的酶学性质和蚓激酶的溶栓效果进行了研究。试验分为两个部分:试验一:蚓激酶的提取、纯化及酶学性质研究以赤子爱胜蚓为原料,经过匀浆抽提、硫酸铵分段盐析、膜分离、Sephadex G-75,DEAE-Sepharose 6 Fast Flow和Phenyl Sepharose High Performance色谱分离、电泳等技术对蚓激酶进行分离纯化及鉴定,并研究pH、温度、金属离子与抑制剂对蚓激酶活性的影响以及蚓激酶的作用机理。结果表明:经分离纯化后的蚓激酶比活为5100 U/mg,SDS-PAGE电泳分析得两条带,相对分子质量为32000和33500;在中性和略偏碱性环境中稳定且活性高;温度适应范围广;不同种类及浓度的金属离子对蚓激酶活性的影响不尽相同;抑制剂及底物特异性研究发现,蚓激酶属于丝氨酸蛋白酶,同时含有二硫键。体外溶栓试验表明,蚓激酶具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的双重作用。试验二:蚓激酶抗角叉菜胶诱导大鼠血栓形成及对凝血指标的影响试验通过大鼠角叉菜胶血栓模型,对蚓激酶的溶栓效果进行了研究。结果显示,高剂量的蚓激酶能够降低角叉菜胶诱导的大鼠尾部血栓形成率,减小角叉菜胶诱导的大鼠尾部血栓平均长度,并对血栓长度的持续增长有缓解作用;与模型对照组相比,高、低剂量组均能使凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)延长,纤维蛋白原含量(Fib)下降,其中高剂量组PT显著延长(P<0.05),维蛋白原含量明显降低(P<0.05),差异具有统计学意义;而且,高剂量的蚓激酶还能缓解注射角叉菜胶引起的体重负增长,说明蚓激酶能够提高机体的纤溶功能,具有预防和缓解血栓形成的作用。
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