BCL9基因沉默对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力作用研究

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目的:初步研究BCL9基因在三种乳腺癌细胞株中的表达差异,分析三种不同乳腺癌细胞株细胞生物学特性:增殖、侵袭及迁移能力的差异及其意义,并进一步探讨BCL9基因的沉默对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力的影响及意义。方法:1分析三种不同表型的人乳腺癌细胞株,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-453中BCL9的mRNA及蛋白表达水平,筛选出高表达BCL9的细胞株。2通过流式细胞术检测细胞周期,计算增殖指数,比较三种细胞株之间增殖能力。采用细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验比较三者细胞迁移和侵袭能力。3构建BCL9慢病毒质粒shRNA,针对高表达BCL9的细胞株做BCL9基因沉默实验。4采用Transwell细胞小室以及细胞划痕实验进一步研究BCL9基因的敲除对乳腺癌细胞株侵袭及迁移能力的影响。结果:1 RT-PCR检测细胞株BCL9的mRNA表达:MDA-MB-231(0.016±0.004)>MCF-7(0.008±0.002)>MDA-MB-453(0.004±0.002),(各组间比较,P<0.05)差异有统计学意义。BCL9蛋白水平在细胞间表达量为MDA-MB-231(0.629±0.101)>MCF-7(0.397±0.196)>MDA-MB-453(0.204±0.990)(各组间比较,P<0.05),差异有统计学意义;2流式细胞术增殖指数显示MDA-MB-231(0.483±0.010)>MDA-MB-453(0.358±0.032),MCF-7(0.397±0.061)(各组间比较,P<0.05),差别有统计学意义;Transwell细胞侵袭实验:穿膜细胞数:MDA-MB-231(417.80±6.94)>MDA-MB-453(379.60±11.99)>MCF-7(9.40±1.14)(各组间比较,P<0.05),差异有统计学意义;细胞划痕实验:MDA-MB-231(0.716±0.021)>MDA-MB-453(0.331±0.021)>MCF-7(0.272±0.017)(各组间比较,P<0.05),差异有统计学意义。3针对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231运用慢病毒细胞转染技术进行BCL9基因沉默;4 Transwell细胞小室实验细胞数:空白组(420.50±3.704)/阴性对照组(417.00±5.310)>实验组(151.50±7.580)(P<0.05),差异有统计学意义;细胞划痕实验划痕愈合率:空白组(0.712±0.127)/阴性对照组(0.709±0.015)>实验组(0.382±0.012)(P<0.05),差异有统计学意义。结论:1通过检测三种人乳腺癌细胞株中BCL9基因及蛋白的表达水平,发现BCL9在三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞中表达水平较高。2通过分析三种不同表型乳腺癌细胞株,细胞的增殖、侵袭和迁移能力均有差别,三阴性乳腺癌的MDA-MB-231细胞株的增殖、侵袭和迁移能力均较高。3 BCL9基因的沉默可有效抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭及迁移能力,提示BCL9可能成为抑制乳腺癌细胞侵袭及转移新的分子靶点。
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