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本研究采用细胞培养,细胞粘附分析、RNA干扰、Western blot分析等细胞分子生物学技术和方法;以Rh1、Rh30、HT29和HeLa细胞为实验对象,综合研究了白藜芦醇通过PP2A-ERK1/2信号通路抑制肿瘤细胞粘附分子机理。结果如下:1白藜芦醇抑制肿瘤细胞粘附Rh1、Rh30、HT29、HeLa细胞用不同浓度的白藜芦醇(10-100 μM)处理4 h,尔后用IGF-1(10 ng/ml)刺激1 h。分别采用CN IV(0.2 μg/ml)、纤连蛋白(0.5μg/ml)或层粘连蛋白(0.5μg/ml)包被方法评估肿瘤细胞粘附,台盼蓝染色和MTS分析细胞活性。结果显示:白藜芦醇浓度依赖地抑制肿瘤细胞粘附,但在相同时间内不抑制肿瘤细胞活性。提示:白藜芦醇抑制肿瘤细胞粘附。2白藜芦醇抑制Erk1/2介导肿瘤细胞粘附Rh1、Rh30、HT29 和/或 HeLa 细胞、或感染慢病毒 shRNAErk1/2 和 shRNA GFP 的 Rh30 和 HeLa 细胞、或感染腺病毒 Ad-MKK1-R4F、Ad-MKK1-K97M 和Ad-GFP的Rh30和HeLa细胞,用白藜芦醇(10-100 μM或100 μM)处理4 h尔后用IGF-1(10ng/ml)刺激1 h,或U0126(5μM)预处理1 h后白藜芦醇(100 μM)处理4 h和IGF-1(10 ng/ml)刺激1 h。Western blot分析相关蛋白表达,用CNIV包被方法评估肿瘤细胞粘附。结果显示:白藜芦醇抑制IGF-1刺激细胞Erk1/2磷酸化;U0126抑制Erk1/2或下调Erk1/2强化白藜芦醇抑制IGF-1刺激细胞Erk1/2磷酸化和细胞粘附;钝化或持续激活MKK1表达影响白藜芦醇抑制IGF-1刺激Erk1/2磷酸化和细胞粘附。提示:白藜芦醇抑制Erk1/2介导肿瘤细胞粘附。3白藜芦醇通过激活PP2A抑制Erk1/2依赖的肿瘤细胞粘附Rh1、Rh30、HT29 和/或 HeLa 细胞、或感染腺病毒 Ad-PP2A-wt、Ad-dn-PP2A和Ad-GFP的Rh30和HeLa细胞,用白藜芦醇(10-100μM或100 μM)处理4 h,后用 IGF-1(10ng/ml)刺激 1h,或用冈田酸(OA,100nM)或 U0126(5μM)预处理1 h后白藜芦醇(100 μM)处理4 h和IGF-1(10 ng/ml)刺激1 h。Western blot分析相关蛋白表达,用CNIV包被方法评估肿瘤细胞粘附。结果显示:白藜芦醇激活由IGF-1抑制的PP2A活性;冈田酸抑制PP2A或钝化PP2A表达抵抗白藜芦醇抑制IGF-1激活Erk1/2依赖的肿瘤细胞粘附,而PP2A过表达强化白藜芦醇抑制IGF-1激活Erk1/2依赖的肿瘤细胞粘附。提示:白藜芦醇通过激活PP2A抑制Erk1/2依赖的肿瘤细胞粘附。