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第一部分目的:本实验观察理冲生髓饮(LCSSY)有效组分对卵巢癌裸鼠皮下移植瘤组织中微环境相关因子的改变,探讨LCSSY有效组分对卵巢癌侵袭转移的抑制作用及相关分子机制,探索LCSSY对卵巢癌多信号靶点的作用机制。方法:建立Balb/C裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、贝伐单抗组、LCSSY有效组分低剂量组、LCSSY有效组分中剂量组、LCSSY有效组分高剂量组。观察药物作用后裸鼠的肿瘤生长情况,各组给药干预18天,其中每隔两天测量瘤体体积,绘制生长趋势,于最后一次给药后处死裸鼠,将瘤体称重,采用RT-PCR检测瘤体中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达情况;免疫组化法检测瘤体中人毛细血管内皮细胞(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)、IL-1、低氧诱导因子-1(HIF-1)表达;WesrernBlot法检测转化生长因子-β相关激酶(Tak1)、去磷酸化转化生长因子-β相关激酶(p-Tak1)、核因子κB抑制蛋白激酶(IKKα)、去磷酸化核因子κB抑制蛋白激酶(p-IKKα)、核因子κB抑制蛋白(IKBα)、MMP9、TNF-α、IL1p表达的差异。结果:1.与模型组相比,LCSSY有效组分不同剂量组均可抑制卵巢癌肿瘤生长(P<0.05)。2.与模型组相比,LCSSY有效组不同剂量组均能够降低肿瘤组织中TNF-α、IL-1p的mRNA表达,抑制效果呈量-效相关性(P<0.05),其中LCSSY高剂量组和贝伐单抗组中IL-1β mRNA表达未见明显差异(P>0.05)。3.与模型组比较,LCSSY有效组分不同剂量组均能够降低卵巢癌组织VEGF、MMP9、IL-1、HIF-1蛋白的表达,且差异显著(P<0.05)。4.与模型组比较,LCSSY有效组分不同剂量和贝伐单抗对Tak1、p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα、TNFα、IL1β、MMP9 均有下调作用,其中LCSSY有效组分不同剂量和贝伐单抗对p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα、TNFα、IL1β、MMP9的下调作用有显著差异(P<0.05),LCSSY不同剂量呈量-效相关;但LCSSY不同剂量和贝伐单抗组对Tak1的表达未见明显差异(P>0.05)。结论:1.LCSSY有效组分能够抑制卵巢癌的生长。2.LCSSY有效组分可能是抑制基质金属蛋白酶(MMP9)、炎性相关因子(TNF-α、IL-1、IL-6)、缺氧诱导因子(HIF-1)调控卵巢癌侵袭转移微环境。3.LCSSY有效组分可能激活相关通路激活因子(p-Tak1、IKKα、p-IKKα、IKBα)的表达,多通路、多靶点的抑制卵巢癌新生血管生长因子(VEGF)的表达,抑制卵巢癌的侵袭和转移。第二部分目的:观察理冲生髓饮有效组分不同剂量作用卵巢癌SIC0V3细胞增殖与凋亡、侵袭与转移和血管生成的改变,验证理冲生髓饮有效组分抑制卵巢癌SK0V3细胞的侵袭和转移能力,探索其相关机制。方法:体外培养卵巢癌SK0V3细胞,并且制备LCSSY有效组分含药血清,分为LCSSY有效组分高、中、低剂量组;培养鸡胚绒毛尿囊膜血管模型,随机分为LCSSY含药血清高、中、低药物组以及贝伐单抗组和空白组,观察各组药物对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的形态学改变;MMT法检测卵巢癌SK0V3细胞在不同剂量LCSSY含药血清作用后24h和48h的增殖抑制率;应用划痕实验、Transwell小室方法观察各组药物对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响;应用Elisa法检测不同剂量LCSSY有效组分含药血清和贝伐单抗作用后卵巢癌SKOV3细胞上清液中VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-tx的表达。结果:1.LCSSY有效组分作用后,新生血管中的1、2级血管数目均有不同程度减少,具有统计学意义(P<0.05);LCSSY有效组分不同剂量抑制血管生成效果仍低于贝伐单抗组(P<0.05);LCSSY有效组分中剂量组1、2级血管较LCSSY有效组分低、高剂量组相比数显著减少(P<0.05)。2.LCSSY有效组分不同剂量对卵巢癌SKOV3细胞作用24h和48h后细胞增殖抑制率,结果显示：随治疗时间延长,细胞的存活率和药物剂量呈负相关,具有时间的依赖性(P<0.05)。3.各组药物作用24h后,空白组划痕几乎完全愈合,LCSSY有效组分高剂量组和贝伐单抗组的细胞划痕愈合能力降低,随时间的增加,划痕面积未见明显减少(P<0.05)。4.Transwell小室结果显示空白组卵巢癌SKOV3细胞被染色面积大,迁移细胞数目显著增多,LCSSY有效组分各剂量组和贝伐单抗组卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移作用显著降低(P<0.05);其中迁移抑制能力贝伐单抗组>LCSSY有效组分高剂量组>LCSSY有效组分中剂量组>LCSSY有效组分低剂量组。5.与空白组比较,LCSSY有效组分各剂量组和贝伐单抗组细胞上清液VEGF、MMP-9、IL-6、IL-1、TNF-a的表达均明显下调,其中VEGF、IL-6、IL-1、TNF-a表达水平与药物剂量呈正相关(户<0.05);MMP-9在各组剂量中比较未见明显差异(P>0.05)。结论:1.LCSSY有效组分能够抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和转移的能力。2.LCSSY有效组分对卵巢癌SK0V3细胞的抑制作用呈现浓度和时间的依赖性。3.其机制可能与相关炎性因子(如IL-6、IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF-a)的改变有关,进一步抑制血管生长因子VEGF的表达,抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。