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目的探索人、兔结膜上皮细胞体外培养的较好方法，观察其体外生长特性。检测兔结膜上皮细胞对5’—溴脱氧尿嘧啶(BrdU)的标记保留情况，为进一步探索结膜上皮干细胞的定位以及培养的结膜上皮体外移植提供基础。方法分别采用二种方法(组织块培养法、混合消化法)，三种培养基(Ⅰ液为DMEM／F12加10％胎牛血清、Ⅱ液为DMEM／F12加5％胎牛血清及EGF等各种因子、Ⅲ液为不加任何血清的Ⅱ液)及不同换液频率培养人结膜上皮细胞，摸索较好的培养条件，观察不同时期细胞的贴壁率、形态、数量、并进行免疫荧光染色鉴定。尝试在羊膜、饲细胞层上培养人结膜上皮细胞。观察兔不同部位结膜上皮细胞的体外生长特性，通过BrdU标记及流式细胞仪测定其细胞周期，增殖细胞核心抗原染色的方法比较不同部位的兔结膜上皮细胞的增殖活性。兔活体注射BrdU后，不同时间间隔检测结膜上皮标记保留细胞。结果原代培养人结膜上皮细胞用混合消化培养法较好。细胞生长较快，获得细胞量大。组织块培养法细胞生长缓慢，需较长时间达到细胞的融合，获得的细胞数较混合消化培养法低。原代接种时用含10％胎牛血清的培养液，人结膜上皮细胞容易存活和贴壁，4天后改用低血清的培养液维持培养，有利于人结膜上皮细胞的生长传代。24h及48h的换液频率对细胞生长有利。在羊膜上培养的人结膜上皮细胞生长良好。来自兔睑结膜及穹窿部结膜上皮的细胞生长速度较快、位于S期的细胞较多，来自球结膜的细胞生长较慢、位于S期的细胞较少，兔结膜上皮细胞的增殖活性由高到低依次为：睑结膜、穹窿结膜、球结膜。应用间接免疫荧光染色，人结膜上皮细胞抗角蛋白13染色阳性；兔结膜上皮抗广谱角蛋白染色阳性。兔腹腔注射BrdU后短期观察1，2，3，5d，BrdU标记阳性细胞数量的高峰位置从睑皮肤粘膜交界处向穹窿部移行，所有切片的睑皮肤粘膜交界处内均可见较多的BrdU标记阳性细胞。连续注射BrdU7d后，追踪6wk后观察兔结膜上皮的BrdU标记阳性细胞主要保留在睑皮肤粘膜交界处。兔眼结膜上皮增殖细胞核心抗原阳性细胞主要位于睑皮肤粘膜交界处，散在阳性细胞位于穹窿部。结论(1)原代培养人结膜上皮细胞用混合消化培养法较好。(2)原代接种时用含10％胎牛血清的培养基保证上皮细胞的存活和贴壁，然后改用低血清加因子的培养基维持培养有利于人结膜上皮细胞的生长传代。羊膜是人结膜上皮细胞生长的良好载体。(3)体外培养兔结膜上皮细胞的增殖活性由高到低依次为睑结膜、穹窿部、球结膜。(4)短期和长期标记保留实验说明兔眼睑皮肤粘膜交界处可能含有兔结膜上皮干细胞。