BRF2在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发病过程中的作用研究

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背景及目的:  慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)是一种病程超过12周的、鼻窦黏膜的炎症性疾病,且多与鼻炎同时存在。按照CPOS-2007的分类方法,CRS分为不伴有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)和伴有鼻息肉的慢性鼻-鼻窦炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)。CRS的病因学十分复杂,细菌感染、变态反应、鼻部解剖学异常被认为是该病的三大主要致病因素,并且三者是相互联系相互影响的。CRSsNP通常以非感染性、非变应性的炎症过程形式存在,CRSwNP则多与变应性因素有关。BRF2蛋白由BRF2基因(位于染色体8p12位置)转录翻译产生,是转录因子ⅢB上的亚基,参与RNA聚合酶Ⅲ催化小分子RNA生成。BRF2被广泛报道在肺癌、乳腺癌等多种癌症患者的肿瘤组织中高表达,并有研究表明BRF2的高表达与肺癌患者的预后存在相关关系。综上推测,BRF2基因与转录因子ⅢB之间的关系可能决定了BRF2蛋白在疾病发生发展过程中存在重要的调控作用。多项研究表明,炎症、氧化应激、内质网应激三者是相互联系的。Gouge J等发现BRF2参与调控细胞的氧化应激,而细胞的氧化应激与内质网应激高度相关。蛋白GRP78是一种内质网应激标示物。故我们猜想BRF2在CRSwNP中的作用可能与蛋白GRP78有关。本实验目的在于探讨BRF2在CRSwNP发生发展中的意义。  方法:  选取山东大学第二医院耳鼻咽喉头颈外科慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)住院并手术的患者37例,收集手术中获得的鼻息肉组织作为实验组(即CRSwNP组);选取未患CRS,鼻息肉及过敏性鼻炎的鼻中隔偏曲患者18例,于鼻内镜手术中取得下鼻甲粘膜作为对照组。采用免疫荧光染色检测BRF2在CRSwNP组中的表达与定位;脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激体外培养的人鼻粘膜上皮细胞后,采用免疫荧光检测BRF2在细胞中的表达及定位,western blot及实时荧光定量pcr检测BRF2和GRP78在细胞中的表达。  结果:  (1)组织免疫荧光结果显示,相对于对照组,BRF2在CRSwNP组中的表达显著上调,差异具有统计学意义(P=0.001)。此外,在CRSwNP组中BRF2在胞浆内分布明显多于对照组,差异有统计学意义(P=0.002)。(2)细胞免疫荧光结果显示:在正常培养的人鼻粘膜上皮细胞(对照组)中,BRF2主要表达于核内,在经LPS刺激后的人鼻粘膜上皮细胞(6h组除外)中,该蛋白的表达明显增多,差异具有统计学意义(P<0.05),且在细胞浆中表达量(6h组除外)明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)在体外培养的人鼻粘膜上皮细胞中,经LPS作用后,BRF2(6h组除外)及GRP78的蛋白相对表达量显著高于未加LPS刺激的对照组,差异有统计学意义(P<0.05);BRF2及内质网应激标志物GRP78的mRNA(6h组除外)的相对表达量明显高于未加LPS的对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。  结论:  本实验证明了BRF2在CRSwNP息肉组织中表达上调且在胞浆中的分布明显增多;在体外,LPS刺激可诱导鼻粘膜上皮细胞中BRF2表达上调,内质网应激相关蛋白GRP78表达上升,内质网处于应激状态。故BRF2可能出核,介导内质网应激,从而参与了CRSwNP的发病过程。
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