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当前,随着人口数量的增加、城市化进程的加快和激素类药物的大量使用,越来越多的激素类化合物被排放到环境中,对生态环境和人类健康造成了极大的破坏和影响。激素类化合物,又称为环境内分泌干扰物质,是具有高稳定性、难降解的一类持久性有机化合物,其低剂量就可以引起严重生理效应,因此其所引起的环境污染问题备受关注而成为研究的热点,其中环境雄激素是主要的内分泌干扰物之一,对生物的健康和生态安全构成严重的威胁。 本研究采用富集培养的方法,从福建某池塘底部的污泥中分离筛选和纯化到一株高效睾丸酮降解菌,对睾丸酮降解菌在液体培养基的降解特性进行了研究,以及进行16SrDNA的鉴定和系统发育学分析,并且对该菌株的降解条件进行了响应曲面的优化研究。主要研究结果和结论归纳如下: 1、对从池塘的污泥中分离的菌源C53进行纯化,获得四株睾丸酮降解菌C53-20、C53-25、C53-38、C53-42。在睾丸酮浓度为1mM的液体无机盐培养基中37℃、180 r/min培养12小时,细菌C53-20、C53-25、C53-38、C53-42对睾丸酮的降解率分别为:45%、26%、29%和32%。 2、通过对菌株C53-20进行16SrDNA的PCR扩增,得到一条长度为1.5 kb的片段,测序的结果与Genbank数据库进行序列同源性比对,并进行系统发育学的分析,确定其菌株为克雷伯氏菌属。 3、在12小时内对培养中的菌株C53-20每隔1小时取一次样,分别用紫外可见分光光度法(UV-Vis)和高效液相色谱(HPLC)测定菌液中的生物量和其睾丸酮含量。用SPSS统计软件对所测得的两组数据进行相关性分析。根据相关性分析结果,在0.99置信度(P<0.01)下两者的相关系数为0.893,可知菌株生长量与降解睾丸酮之间呈显著线性相关。 4、应用响应面法来优化能够促进C53-20菌株生物量大量生长的主要培养条件,以此来寻找菌株C53-20降解睾丸酮的最佳培养条件。通过单因素实验对菌株C53-20的降解条件进行了优化,结果表明:睾丸酮的最佳浓度为0.5mM,pH的最佳值为6.5,温度的最佳值为37℃。再通过最陡爬坡实验分析以确定各个因素的步长和方向。最后采用Box-Behnken实验,通过SAS的RSREG(响应面回归)过程对数据进行分析及二次回归拟合,并基于所得模型绘制3D响应曲面及2D等高线图,所得结果表明三个因素之间的相互作用显著影响菌的生长量。同时,得出C53-20菌株在降解睾丸酮的过程中最佳的温度为38.9℃,睾丸酮最佳的浓度为2.28mM,最佳的pH生长环境为8.4,此时在理论上菌液培养12小时的OD600值为0.512。模型的验证实验表明实际所得的值(OD600=0.483)与该理论值较为接近。