论文部分内容阅读
近年来,随着工农业的快速发展,大量危害环境和人类健康的化合物被不断释放到环境中。越来越多的证据证实,环境中许多化学污染物可干扰野生动物和人类的正常生理活动。研究表明,双酚A（bisphenol-A,BPA）作为环境雌激素可影响两栖动物的生长发育及繁殖,同时,酚类诱导其他动物细胞中雌激素受体（ER）或卵黄蛋白原（VTG）生成的研究也不乏报道,但有关BPA对两栖动物肝细胞中ER和VTG生成及其关系的影响很少有报道。本实验以雄性中国林蛙（Rana chensinensis）为实验动物,探讨BPA对中国林蛙肝细胞中ER和VTG的影响,旨在揭示酚类环境化学污染物的作用机制,从而深入理解BPA的雌激素效应,探讨雌激素受体和卵黄蛋白原的关系,为澄清BPA的分子机制提供理论依据。本实验将中国林蛙暴露于10-7、10-6、10-5mol/L BPA水体中持续10d、20d、30d;以10-9和10-8mol/L 17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）作为阳性对照,取其肝脏组织,用免疫组织化学方法检测ER和VTG的表达,用原位杂交方法检测ER mRNA的表达。实验结果及结论如下:1.免疫组织化学检测结果可见,在各BPA处理组和E2处理组中均有ER表达,ER阳性反应在胞核呈黄或棕黄色,在胞质中呈片状。对ER表达相对值检测结果表明,与对照组相比,各BPA处理组的中国林蛙肝细胞中ER表达量显著上调,且BPA处理组的ER表达量显著低于E2对照组。BPA处理组中,ER表达量随BPA浓度的升高而上调,随着BPA处理时间的延长而上调。与E2处理组中,ER表达的变化趋势相似。原位杂交法检测ER mRNA的表达结果表明,在BPA处理组和E2处理组肝细胞中均存在ER阳性核颗粒。阳性反应在胞核呈蓝色,在胞核膜上呈环形或半环形,胞质中呈片状。各BPA和E2处理组中ER mRNA的表达量均高于对照组。各处理组中,ER mRNA的表达随着处理时间的延长而增加,随着处理浓度的增大而增加,且差异显著,但BPA10-5和BPA10-6 mol/L处理组ERmRNA的表达差异不显著。在相同的处理时间,BPA诱导ER mRNA表达与ER蛋白合成具有相关性,说明BPA在中国林蛙肝细胞内存在剂量效应和积累效应。同时,BPA的效应同E2的效应相似,说明BPA和E2引起ER表达的途径相似。但ER蛋白合成滞后于ER mRNA表达量增加的时间,可能是由于BPA和E2在短时间内可引起ER mRNA表达的显著变化,而蛋白的合成则是一长时过程。2.用免疫组织化学技术检测经过BPA处理后中国林蛙的肝细胞中VTG的表达,VTG阳性反应在胞质中呈黄或棕黄色。对其表达相对值检测结果表明,各BPA处理组与对照组相比,肝细胞中VTG表达量差异显著,BPA处理组的VTG表达量上调。BPA处理组的VTG表达量低于E2对照组。在BPA处理组中,VTG表达量随BPA处理时间的延长而上调,随处理浓度的升高而上调。表明VTG的表达与BPA间有剂量-时间效应关系,与E2处理组的效应相似。BPA10-5mol/L处理组有导致中国林蛙肝细胞中VTG合成水平降低的趋势,可能是BPA10-5mol/L处理组开始引起中国林蛙肝细胞坏死。3.BPA处理后从中国林蛙肝细胞中ER与VTG之间的关系可见,BPA能诱导ER和VTG的表达增加,二者的变化趋势基本一致,说明ER的合成过程伴随着VTG的生成,VTG的表达依赖于ER的水平,BPA通过ER途径诱导VTG蛋白的合成。4.本实验中E2作为阳性对照,在相同处理时间,BPA与E2处理导致ER和VTG的变化趋势基本一致,说明BPA产生的效应与E2相似,但是,BPA的最低处理浓度比E2的最高处理浓度高一个数量级,表明E2的雌激素效应高于BPA的。上述结果表明,BPA可影响中国林蛙肝细胞中ER和VTG的表达,BPA可通过诱导ER表达来诱导VTG的合成。