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目的:1)明确从人重组的粒细胞集落刺激因子(human recombination granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)动员的外周血干细胞采集物中分离诱导树突状细胞(dendritic cells,DCs)的可行性。2)探讨利用脂质体包裹人肺腺癌细胞株A549总RNA转染DCs来制备疫苗的可行性及实验条件的优化。3)观察DCs疫苗在体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。方法:2008年8月—2009年8月间本院外周血干细胞移植术供者按照常规方法皮下注射10μg·kg-1·d-1,连续5天,在第5天动员达到高峰时采集外周血干细胞。收集15例采集物。利用密度梯度离心法从外周富集血中分离出单个核细胞,贴壁获得单核细胞,并进一步诱导为DCs。同时利用提取的A549细胞总RNA转染DCs来制备疫苗,并与T细胞混合培养,扩增细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs);实验分为转染A549细胞总RNA的DCs组、未转染DCs组和转染空脂质体DCs组,分别以流式细胞术(FCM)鉴定DCs表型、酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR掺入检测T细胞增殖能力及乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异。结果:1)转染总RNA组DCs表面CD40、CD80、CD83、HLA-DR的表达较未转染组DCs和转染空脂质体组DCs均有升高,CD40在三组的表达率分别为:(69.01±7.67)%、(19.28±3.51)%和(39.62±2.72)%;CD80在三组的表达率分别为:(74.39±6.46)%、(15.48±3.03)%和(25.70±2.92)%;CD83在三组的表达率分别为:(81.79±4.61)%、(13.29±2.34)%和(31.42±1.97)%;HLA-DR在三组的表达率分别为:(76.53±5.13)%、(49.23±4.05)%和(29.94±3.53)%,差异有统计学意义(P<0.05);2)转染总RNA组DCs的IL-12和IFN-γ分泌水平较未转染组及转染空脂质体组明显升高(P<0.05),三组IL-12分别为:(543.24±68.33)pg/ml、(77.11±27.65)pg/ml和(167.78±31.84)pg/ml;三组IFN-γ分别为:(122.95±32.84)pg/ml、(41.06±10.97)pg/ml和(56.08±15.96) pg/ml;3)3H-TdR掺入试验所得的cpm值,转染A549总RNA的DCs组:7 437±720,未转染DCs组:2 207±296,转染空脂质体的DCs组:2 443±314,阳性对照组为:16 739±91,差异有统计学意义(P<0.05);4)LDH释放法可见转染A549总RNA的DCs组的特异性杀瘤活性(58.55±8.27)%,明显高于未转染组(36.03±4.00)%和转染空脂质体组(33.47±8.21)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1)利用密度梯度离心法可以从经rhG-CSF动员的外周血干细胞采集物中分离诱导出具备典型形态和免疫表型的DCs。2)可采用脂质体包裹A549总RNA来转染DCs来制备肿瘤疫苗。3)DCs疫苗在体外具有较强的刺激T细胞增殖能力和杀瘤活性。